李云洲 岳宁波 陈相儒 李玉龙 曹贺贺 闫见敏 梁 燕

(1贵州大学农学院，贵州 贵阳 550025；2西北农林科技大学园艺学院，陕西 杨凌 712100；3西北农林科技大学植物保护学院，陕西 杨凌 712100；4西北农林科技大学资源环境学院，陕西 杨凌 712100)

番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus，TYLCV)属双生病毒科(Geminiviruses)菜豆金色花叶病毒属(Begomoviruses)[1]。番茄幼苗感染TYLCV 后，会造成严重损失[2－3]。TYLCV 已成为威胁番茄安全生产的重要病害之一[4－5]，该病毒主要通过烟粉虱(Bemisia tabaci)传播[6－7]。粉虱很难控制，所以培育TYLCV 抗性新品种是控制TYLCV 蔓延的重要途径。目前，已发现的番茄抗TYLCV 标记/基因主要有Ty－1[8－10]、Ty－2[11－12]、Ty－3[10－11]、Ty－4[13]、Ty－5[14－15]和Ty－6[16]，其中Ty－1 和Ty－3 是一对等位基因，在番茄育种中应用最为广泛[17－18]。但是，TYLCV 属于单链DNA(single strand DNA，ssDNA)病毒，易变异，因此造成抗性不稳定[19]。

RNAi 是植物抗病毒的重要机制[20]。通过RNAi技术抗TYLCV 可以解决因病毒变异而造成的抗性不稳定的现象。RNAi 是指在生物体内双链RNA(double strand RNA，dsRNA)分子所引起的序列特异性降解靶基因，引发内源靶基因沉默的现象。RNAi 现象最先发现于秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)，将dsRNA注入虫体，可以抑制转录后基因沉默，从而抑制同源基因的表达，之后逐渐在昆虫、植物以及人体中陆续报道[20－21]。RNAi 是真核生物中普遍存在的、比较保守的抗病毒机制。

人工设计dsRNA 沉默靶标基因已被广泛应用，如将病毒基因作为靶标设计dsRNA 已成功应用于马铃薯Y 病毒(Potato virus Y，PVY)、大麦黄矮病毒(Barley yellow dwarf virus，BYDV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus，TMV)和TYLCV[22－24]。参与RNAi 过程主要有三类蛋白:Ⅲ型核糖核酸酶蛋白(Dicer-like，DCL)、AGO 蛋白(Argonaute，AGO)、RNA 依赖型RNA聚合酶(RNA dependent RNA polymerases，RDR)。内源或外源dsRNA 经DCL 酶加工miRNA (microRNA)或siRNA(small interference RNA)，miRNA 或siRNA 与AGO 结合形成 RNA 沉默复合体(RNA-induced silencing complex，RISC)，RISC 通过碱基互补配对方式降解和干扰靶标核酸或病毒，降低病毒的转录本[25－26]，目前RNAi 技术已在多种病毒中成功应用[27]。……