仇相书，史 宁，朱翔宇，任世斌，张海森，李 海，鲁会军，金宁一*

(1.西北农林科技大学 动物医学院，陕西 杨凌712100；2.军事科学院 军事医学研究院 军事兽医研究所，吉林 长春130122；3.吉林农业大学 动物医学院，吉林 长春130122；4.昭苏县西域马业有限责任公司，新疆 伊犁 835600)

GETV在分类上属于披膜病毒科(Togaviridae)甲病毒属(Alphavirus)的单股正链RNA病毒，其基因组长度约为11 689 nt，包含2个独立的开放阅读框架(open reading frames，ORF)，分别位于基因组5′端2/3部分(约7 407 nt)和后1/3部分(约3 759 nt)。前者负责非结构蛋白(non-structural protein，NSP)NSP1～NSP4的编码，NSP参与病毒RNA转录和复制、RNA capping以及多聚蛋白切割等过程；后者则负责编码结构蛋白，包括Capsid、E3、E2、6K和E1[10]。值得注意的是，由E基因编码的结构蛋白不仅构成了病毒粒子的表面突起，而且是GETV吸附靶细胞及诱发机体抗感染免疫的关键蛋白[11]。E2蛋白主要由3个结构域(A、B和C)组成，其中A和B包含影响免疫原性、病毒吸附和组织噬性的大部分残基[12]。

本研究对GETV毒株序列进行比对分析后，选择结构蛋白E2结构域保守区段为靶基因，参照实验室保存的GETV SD17/09株(GenBank登录号为MH106780.1)E2基因序列，扩增E2d结构域基因，克隆至原核表达载体，在大肠杆菌表达系统中实现重组蛋白E2d表达；E2d蛋白经纯化和透析后，免疫新西兰兔，以期获得抗E2d蛋白多克隆抗体，为开展E2蛋白功能研究、GETV检测方法的建立和病原学研究提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 毒株、菌株与细胞株GETV毒株SD17/09、Vero细胞株由本实验室保存；感受态细胞BL21(DE3)、DH5α购自大连TaKaRa公司。

1.2 试剂及其他反转录试剂盒Vazyme HiS-criptⅡ1st Strand cDNA Synthesis Kit购自诺唯赞；Ex Taq PCR酶、T4DNA Ligase、DL5000 DNA Marker、载体pMDTM19-T、载体pET-22b(+)购自大连TaKaRa公司；胶回收试剂盒购自BioFluX公司；……