犬冠状病毒M和N蛋白单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定
2021-09-10甘军纪吕海峰田晓彦刘秀梵
甘军纪,吕海峰,汤 也,田晓彦,刘秀梵
(扬州大学 兽医学院 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心/江苏省人兽共患病重点实验室,江苏 扬州 225009)
犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)是一种单股正链RNA病毒,通常引起犬轻度到严重的胃肠炎。尽管CCV感染通常局限于肠道,但近年来出现的泛嗜型 CCV变异株,能引起幼犬全身性和致死性感染[1]。犬胃肠炎可由多种病原体引起,包括病毒、细菌或寄生虫。最常见的病毒性肠炎病原体除了CCV,还有犬细小病毒(CPV)[2]、犬腺病毒2型(CAV-2)和犬瘟热病毒(CDV)等[3]。因此,快速的病毒学检测对控制犬病毒性肠炎疾病至关重要。
CCV基因组全长约30 kb,5′端有2个大开放阅读框(ORFs), 1a和1b,其编码病毒复制酶多聚蛋白。ORF1b的下游有几个小ORFs,通过亚基因组mRNA表达,编码几个结构蛋白和非结构蛋白。CCV结构蛋白有4种,分别为刺突蛋白(S,170~220 kDa),小膜蛋白(E或SM,9.2 kDa),膜蛋白(M,32 kDa)和核衣壳蛋白(N,43~50 kDa)[4-6]。S糖蛋白形成冠状病毒的特征性刺突,参与病毒粒子与宿主细胞受体结合以及介导病毒-细胞和细胞-细胞融合,主要诱导中和抗体,与病毒毒力相关[7-8]。小膜蛋白(E)是一种8~12 kDa的小多肽,在病毒粒子的包膜中发现含量很少,但是病毒出芽所必须的,与M蛋白一起,对病毒包膜的组装很重要。M蛋白是一种膜结构糖蛋白,在包膜蛋白中含量最高,是一种Ⅲ型糖蛋白,由短的氨基端外结构域、三跨膜结构域和长羧基端内结构域组成[9-10],是病毒组装和形成的关键成分,含有B细胞识别表位。冠状病毒核衣壳(N)是一种与基因组RNA所形成的复合物,在病毒粒子装配过程中与病毒膜蛋白相互作用的结构蛋白,对提高病毒转录和装配效率起着至关重要的作用,N 蛋白是CCV第二大结构蛋白[11]。……
