贾元威，王 萍，谢海棠，沈 杰，胡容峰

(1.皖南医学院弋矶山医院药物临床评价中心，安徽 芜湖 241001； 2.安徽中医药大学新安医学教育部重点实验室，安徽 合肥 230012)

偏头痛流行病学统计显示，偏头痛的流行病学、临床特征和病理生理学存在显著性别差异，男女比例约为1 ∶2-1 ∶3，对女性群体的危害更大[1-5]。血清代谢组学灵敏度高，检测样本易于获取，常作为疾病早期小分子代谢物变化的重要检测手段[6]。本研究构建硝酸甘油型实验性偏头痛大鼠模型，基于SCIEX TripleTOF® 5600 LC-Q/TOF-MS分析技术，采用血清代谢组学，探索偏头痛性别差异机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 SPF级Sprague Dawley大鼠，体质量(180-220) g，购买自济南朋悦实验动物繁育有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK(鲁)20190003。

1.1.2 试剂与仪器 硝酸甘油注射液(河南润弘制药股份有限公司，批准文号：国药准字 H20057216)；SCIEX TripleTOF® 5600 LC-Q/TOF-MS(Foster City, CA)。

1.2 方法

1.2.1 硝酸甘油型实验性偏头痛大鼠模型构建 空白组与模型组，20只大鼠，各包括雌雄两组。大鼠隔天连续(d 1、3、5、7、)皮下注射硝酸甘油(10 mg·kg-1, 2 mL·kg-1)。

1.2.2 样本采集 3%戊巴比妥钠(40 mg·kg-1)进行麻醉，使用采血针腹主动脉采血至5 mL采血管(无抗凝剂)，4 ℃静置过夜，8 000 r·min-1离心15 min，取血清分装于干净的EP管中，-80 ℃保存待测。

1.2.3 样本预处理 血清50 μL加入200 μL含有内标 13C-谷氨酰胺的甲醇溶液(10 mg·L-1)，涡旋震荡5 min，4 ℃，18 000 r·min-1、离心10 min。取上清200 μL于EP管中, 减压挥干溶剂(3.5 h，不加热，真空度10，Temp 4 ℃)，超纯水100 μL复溶，4 ℃，18 000 r·min-1，离心10 min，取上清20 μL进样。

1.2.4 LC-Q/TOF-MS分析条件 色谱柱：Amide XBridge HPLC (3.5 μm; 4.6 mm×100 mm; Waters, USA)，流动相为5 mmol·L-1醋酸铵(pH 9)和5%乙腈，柱温40 ℃，流速0.4 L·L-1，梯度洗脱。MS检测采用正离子和负离子两种模式进行，ESI源参数：Gas 1，33psi；Gas 2，33psi；CUR，25 psi；离子喷雾电压-4 500/4 500 V；TEM，500 ℃；CE：-10/10 V。

1.2.5 统计学处理 采用 Analyst TF 1.6.1(AB SCIEX，MA，USA)进行质谱数据采集，使用 AB SCIEX 的PeakView 和 MultiQuant 2.0进行数据探索和峰面积积分。……