杨清麟，刘子臣，刘 辉，吴林果，胡艳萍

目前肺癌是全球发病率和病死率增长较快的恶性肿瘤之一，其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)占80%以上，约5%的NSCLC出现间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase, ALK)重排[1]。近年来克唑替尼等ALK基因靶向药物临床发展迅速，对晚期NSCLC患者疗效显著。晚期肺癌患者通常无法进行手术，临床活检组织标本、细胞学标本的珍贵性不言而喻。免疫组化是病理科常用的检测方法，经济实用，方便快捷，适合ALK基因重排检测的初筛；荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)检测作为国际公认标准，对ALK基因重排的确诊具有重要意义。本实验通过对肺癌切片经免疫组化染色后再行FISH检测，与直接对切片进行FISH检测的结果进行比较，探索针对ALK基因重排指标免疫组化染色后切片重复利用进行FISH检测的可行性。

1 材料与方法

1.1 材料选取肺癌患者的气管镜活检标本、细胞学标本各20例，每例标本切片分为对照组和实验组。对照组直接对切片行FISH检测，实验组先行免疫组化染色，再对同一张切片进行FISH检测。

1.2 方法(1)免疫组化染色：ALK抗体购自北京中杉金桥公司，显色系统为PV-6000D，采用EnVision两步法染色，切片经二甲苯脱蜡、梯度乙醇脱水，EDTA(pH 9.0)中高温高压修复2.5 min，过氧化氢溶液中处理10 min，一抗37 ℃孵育1 h，二抗37 ℃孵育20 min，DAB显色5 min，苏木精复染后，梯度乙醇脱水，二甲苯透明封片。(2)FISH检测：ALK探针为雅培公司生产，前处理试剂均购自金箓生物公司，切片经二甲苯脱蜡，无水乙醇漂洗后晾干，预处理液80 ℃ 12 min，胃酶37 ℃消化25 min，梯度乙醇脱水后晾干，滴加探针75 ℃变性5 min，37 ℃杂交过夜，含0.3%NP-40的2×SSC洗液常温浸泡5 min后移除去盖玻片，72 ℃洗液2 min洗去未结合的探针，暗处风干后，滴加DAPI复染细胞核并封片，30 min后用荧光显微镜读片。……