王思雨，刘立文

摘 要：为探究促性腺激素对坝上长尾公鸡精液品质的影响，本试验选用28周龄健康、体重一致的坝上长尾公鸡36只，随机分成3组，每组12只，将三个组别分别注射0、10、40 IU促卵泡素，每间隔12 h重复注射，第4天注射100 IU的人绒毛膜促性腺激素（hCG），在第7天对36只鸡进行人工采精，收集各组数据并进行对比分析。采精后用生理盐水溶液对原精液进行5倍、10倍、15倍稀释，然后进行精液品质检查。在显微镜下观察，测得不同稀释倍数生理盐水溶液在低温条件下对精子活率的影响。结果显示，注射促卵泡素10、40 IU与对照组相比差异极显著（P<0.01）;对照组与注射10 IU促卵泡素、注射40 IU促卵泡素的各个分组中精子畸形率数据表现为差异极显著（P<0.01）;稀释处理后的精液在低温保存下结果显示，稀释5倍的精子保存 6 h后活率无显著变化（P>0.05），稀释10倍和15倍的两组的精子活率则显著降低（P<0.05）;在低温保存12 h 后，稀释10倍和15倍的精子活率均显著低于稀释5倍的精子活率（P<0.05）。结果表明，注射促卵泡素可以提高精子活率，降低精子畸形率;精液稀释倍数不同，稀释倍数越高的精子活率越低，稀释倍数越低的精子活率越高;每只最佳注射剂量为10 IU，精液稀释倍数不超过5倍。

关键词：精液品质;坝上长尾鸡;促卵泡素

中图分类号：S831.2 文献标识码：B文章编号：1673-1085（2021）7-0013-05

在2021年最新颁布的《国家畜禽遗传资源品种名录（2021年版）》中共收录畜禽地方品种、培育品种、引入品种及配套系948个，其中地方鸡品种就有坝上长尾鸡。坝上长尾鸡属于河北省特有地方品种，在中国家禽地方品种资源占有一席之地。坝上长尾鸡是经长期自然选育适应当地环境特点形成的蛋肉兼用型品种，具有肉质鲜美、蛋品质好、风味佳等特点，主要分布于河北北部的承德、张家口的坝上地区，体质健壮，对坝上高原恶劣气候环境有良好的适应性[1]。

近年来，地方品种资源越来越稀缺，保种利用工作越来越迫切，也越来越受到重视。有研究表明，不同剂量促性腺激素对公鸡的生殖机能影响很大，可提高精子存活率，降低畸形率;注射促卵泡素后的精液经过稀释，精液量增加，并且随着稀释倍数的不同，精子活率和存活指数也随之改变，但是，在生产实践中，促性腺激素往往在母畜禽上应用比较多，而在公畜禽上使用比较少，特别是对于坝上长尾公鸡上的应用至今未见报道，因此，本试验针对地方特有品种的坝上长尾公鸡开展试验，研究促性腺激素合适剂量及不同稀释倍数对其生殖性能影响，从而为提高珍贵禽种公鸡的利用效率提供一种新的有效途径。

1 试验设计

1.1 材料

选择28周龄健康、体重一致的坝上长尾公鸡36只，由坝上康保坝上长尾鸡饲养合作社提供。垂体促卵泡素〔（2015）兽药GMP证字11004号，100单位×10支〕和人绒毛促性腺激素1〔（2015）兽药GMP证字11004号，1000单位×10支〕，从宁波第二激素厂购买。

1.2 分组与设计

将坝上长尾鸡随机分成三组，即空白组、试验组1、试验组2，每组12只，将三个组别的鸡分别注射0、1IU、40 IU的促卵泡素，每间隔12 h重复注射，第4天注射100 IU的人绒毛膜促性腺激素（hCG），在第7天对36只鸡进行人工采精，收集数据并分析。

1.3 饲养管理

试验鸡每日采食量为230 g，分别在每天08：00、12：00和17：00饲喂颗粒料，每次饲喂量相同。每天对鸡笼进行清扫、冲洗，以保持环境干净卫生。每2 d训练公鸡采精一次。

1.4 采精方法及精液品质检查

采精方法：腹背按摩法，一人握住鸡的双腿，使鸡尾朝前鸡头向后;另一人用左手拇指和食指按摩鸡尾，右手小指和无名指倒夹集精杯，并用拇指和食指按摩鸡腹部，两手同步反复按摩泄殖腔几次后，当公鸡尾羽翘起泄殖腔外翻时，左手顺势从泄殖向鸡尾方向轻轻挤压，精液排出时，右手翻掌，用集精杯将精液全部收集。记录每组公鸡采精量，精液量：0.25～1.1 mL;气味：略带腥味;pH值为7.0;测定公鸡精子存活指数、精液畸形率以及稀釋后精子活力与存活指数。 把采集到的精液用生理盐水稀释，制片，酒精固定（95%），然后用染色液染色、用显微镜观察。

1.5 试验数据统计分析

使用Excel 2010进行统计;利用SPSS 21.0软件对试验数据进行方差分析，以P<0.01为差异极显著，P>0.05为差异不显著。

2 结果与分析

2.1 第一次采精后不同剂量促卵泡素对精子存活指数及畸形率的影响

结果见表1。

由表1可知，对照组、试验组1、试验组2的精子存活指数及精子畸形率之间差异极显著（P<0.01）。

2.2 第二次采精后不同剂量促卵泡素对精子存活指数及畸形率的影响

结果见表2。

由表2可知，空白组、试验组1、试验组2的精子存活指数之间差异极显著（P<0.01）。对照组与试验组小组中精子畸形率之间差异为极显著（P<0.01），试验组1与试验组2间的精子畸形率存在极显著差异（P<0.01）。

2.3 不同稀释倍数在低温条件下对精子活率和存活指数的影响

结果见表3、表4。

由表3可知，稀释处理后的精液在低温保存下，初期三组精子活率均无显著差异（P>0.05）;随着在4 ℃保存时间的延长，稀释5倍的精子保存6 h后活率无显著变化（P>0.05），而稀释10倍和15倍的两组的精子活率则显著降低（P<0.05）。在低温保存12 h 后，稀释10倍和15倍的精子活率均显著低于稀释5倍的精子活率（P<0.05）。

由表4可知，对照组、试验组1、试验组2的精子存活指数之间差异极显著（P<0.01）。

3 讨论

在雄禽中，下丘脑-垂体-性腺轴（HPG轴）可以通过影响生殖激素的分泌合成，进一步调节雄禽生殖过程，影响其生殖机能。HPG轴由下丘脑、垂体以及睾丸所构成，形成了下丘脑-垂体-睾丸轴（HPT轴）。HPT轴对内分泌系统具有重要的调节作用，其过程主要是通过下丘脑分泌抑制激素或促性腺激素释放激素（GnRH），GnRH激活垂体上的特异性受体——GnRH受体（GnRHR），刺激垂体促性腺激素细胞合成和分泌促性腺激素——FSH以及LH，它们经外周的血液循环，最后作用于睾丸，对睾丸的内、外分泌系统产生影响，继而调节雄禽的生殖过程。在此过程中，FSH和LH分别与睾丸中特异受体进行识别，FSH与其受体结合后促进精子的发生;LH与其受体结合后则激活了腺苷酸环化酶，从而促进合成雄激素——睾酮（T），以调节类固醇激素分泌和精子生成过程以及睾丸的发育[2]。在雄禽睾丸内的雄激素中，T含量最高，活性也最强，可作用于睾丸生精上皮细胞促使精子产生，精子进入附睾后在附睾液的作用逐渐发育成熟。 睾酮受体仅存在于睾丸体细胞，生殖细胞本身并没有睾酮受体分布。这表明，T并不直接作用于生殖细胞，而是通过睾丸体细胞对生殖细胞施加影响加以发挥作用[3]。

3.1 不同剂量的促卵泡素对精子存活指数的影响

本试验结果表明，注射卵泡刺激素可以使精子的存活指数提高，随着剂量的增多，效果也表现越好。王霞等[4]报道，尿卵泡刺激素（FSH）联合人绒毛膜促性腺激素对精子存活指数显著增加。表1和表2对比，可以看出在注射不同剂量的卵泡刺激素后，根据注射剂量的不同，公鸡精子存活指数提升的幅度也有所不同：表1中试验组2精子存活指数相比试验组1提升8.6667±1.01278，表2中试验组2相比试验组1提升7.2777±1.58147。可见给种公鸡注射一定剂量的促卵泡素能够有效促进公鸡精子的存活指数，注射40 IU卵泡刺激素后的精子存活指数要高于注射10 IU卵泡刺激素的精子存活指数。

3.2 不同剂量的促卵泡素对精子畸形率的影响

本试验结果表明，随着注射促卵泡素剂量增多，公鸡精子畸形率明显下降，可见给公鸡注射一定剂量的促卵泡素能够有效降低公鸡精子的畸形率。从表1、表2结果分析得出，在注射不同剂量的促卵泡素后，根据注射剂量的不同，公鸡精子畸形率下降的幅度也有所差异：表1中试验组2的精子畸形率相比试验组1下降了0.377±0.0004，表2中试验组2精子畸形率相比试验组1下降0.467±0.1929。注射40 IU的促卵泡素公鸡精子畸形率降低2.1135±0.1752。这与慈光新等[5]人使用注射促卵泡素可以影响坝上长尾鸡精子畸形率的结果较为一致。

3.3 不同稀释倍数在低温条件下对精子活率的影响

本试验结果表明，随着时间的延长，稀释倍数越高反而其精子活率越低，反之，稀释倍数越低其精子活率越高。胡艳娟等[6]的试验证明精子的顶体、顶体膜、线粒体等微细结构与精子功能密切相关，随着时间越长，精子的顶体膜、质膜和核膜出现膨胀或破裂，顶体膨胀变形，线粒体鞘结构破损等，这也就解释了精子在经过低温保存超过一定时间后受精率大幅降低的原因。从表3可以看出，6 h时5倍稀释时精子活率为98.56;当稀释倍数增加到10倍时，其精子活率下降了1.16;当稀释倍数增加到15倍时，其精子活率下降了0.25。表4结果表明，在5倍稀释时精子存活指数为37.34，当稀释倍数上升到10倍时，其精子存活指数下降了7.78;当稀释倍數上升到15倍时，其精子存活指数下降了6.89。

4 结论

本试验研究结果表明促性腺激素对坝上长尾公鸡精液品质具有促进作用，注射10 IU就能够促进公鸡精液品质，如果稀释倍数超过5倍，对公鸡精液品质有影响，建议在生产实践中，对公鸡注射10 IU并且稀释倍数不超过5倍，这样就可以保证精液品质在生产中应用。

参考文献：

[1] 张乐超，刘春杨，张秀玲，等.河北地方品种和五种商品蛋鸡蛋品质分析[J].黑龙江畜牧兽医，2017（ 01上）：135-137.

[2] 鹿碧波，周永蔚，谢秀祯.家禽睾丸主要生殖激素受体的研究进展[J].家畜生态学报，2016，37（12）：6-12.

[3] 袁丽芳，安娜，王善林，等.睾丸间质细胞在小鼠生精恢复过程中的作用[J].生命科学研究，2015，19（1）：6-12.

[4] 王霞，杜江平，李艳，等.少弱畸精子综合征用尿卵泡刺激素联合人绒毛膜促性腺激素治疗前后主群精子的变化[J].生殖医学杂志，2008（04）：301-302.

[5] 慈光新，葛楚天，金艳梅，等.促卵泡素对鸡等级前卵泡细胞发育的影响[J].中国畜牧杂志，2009，45（9）：13-15.

[6] 胡艳娟，白银山，李莉，等.鸡精液稀释与低温保存效果分析[J].中国家禽，2010，32（23）：54.

Effects of Gonadotropin on Semen Quality of Ba Shang Long-tailed Rooster

WANG Siyu， LIU Liwe

（College of Animal Science and Technology of Hebei North University

，Zhangjiakou 075131，China）

Abstract： This study was conducted to investigate the effects of gonadotropins on semen quality of Bashang long-tailed roosters.This experiment by choosing the 28 weeks of age， health dam long tail rooster 36， randomly divided into 3 groups， each group of 12， injecting three groups respectively 0IU， 10IU， 40IU follicle-stimulating hormone， 12h repeated injection intervals， the 4d injection of 100IU of human chorionic gonadotropin （hCG）， on the seventh day to artificial ejaculations， 36 chickens and collect data were analyzed.The original semen was diluted 5， 10， and 15 times with normal saline solution after sperm collection， and then the semen quality was examined.The effect of different dilution ratio of normal saline solution on sperm motility at low temperature was observed under microscope.The results showed that the difference of 10IU and 40IU of FSH was very significant （P<0.01）.The data of sperm malformation rate in the control group and each group injected with 10IU FSH and 40IU FSH showed significant difference （P<0.01）.After cryopreservation， the viability of the 5-fold diluted sperm had no significant change after 6h （P>0.05）， and the viability of the 10-fold and 15-fold diluted sperm was significantly decreased （P<0.05）. After cryopreservation for 12h， the viability of the 10-fold and 15-fold diluted sperm was significantly lower than that of the 5-fold diluted sperm （P<0.05）.The results showed that the injection of follicle stimulating hormone could improve the survival rate of sperm and reduce the rate of sperm deformity.Semen dilution ratio is different， the higher the dilution ratio， the lower the sperm motility rate， the lower the sperm motility rate.The optimal injection dose for each is 10IU， and the dilution is not more than 5 times.

Keywords： quality of semen;ba shang long-tailed rooster;follicle stimulating hormone