郭志雄，孙冷雪，郑嘉敏，蔡灿军，王蓓，李开拓，潘腾飞，佘文琴，陈桂信，潘东明

荔枝果皮BPox的分离纯化及其在果实成熟过程中的表达

郭志雄1,2，孙冷雪2，郑嘉敏2，蔡灿军2，王蓓2，李开拓2，潘腾飞1,2，佘文琴1,2，陈桂信1,2，潘东明1,2

1福建农林大学园艺产品贮藏保鲜研究所，福州 350002；2福建农林大学园艺学院，福州 350002

【】植物第III类过氧化物酶具有广泛的生理功能。前期研究发现荔枝果皮具高活性的离子结合态过氧化物酶（BPox），与果实的着色、成熟密切关联，但其特性、作用机制不清楚。明确BPox的生化特性及其基因表达变化，为进一步研究BPox参与荔枝果实着色和成熟机制奠定基础。以‘乌叶’荔枝成熟果果皮为材料，通过提取及Streamline Phenyl、CM-52、Phenyl Sepharose HP和Superdex 200等柱层析，纯化获得BPox。测定BPox的最适反应pH、最适反应温度、底物特异性、抑制剂等生化特性。采用双倒数法测定其催化愈创木酚、(−)-表儿茶素的Km值及Vmax。应用MALDI串联质谱鉴定BPox的肽段序列，克隆BPox的cDNA。分别测定盛花后58、69、76、80和90 d荔枝果皮BPox的活性变化，应用荧光定量PCR分析BPox的基因表达变化。从荔枝果皮纯化得到BPox最主要的2个组分，分别命名为BPox-2和BPox-3。凝胶过滤层析和SDS-PAGE结果显示，BPox-2和BPox-3的表观分子量分别约为30 kD和34 kD。BPox-2和BPox-3的最适反应pH均为6.0，最适反应温度分别为40℃和45℃；二者具有相似的底物特异性；DTT、ASA和L-Cys等能强烈抑制其活性。BPox-2和BPox-3催化愈创木酚的Km值分别为2.97和2.58 mmol∙L-1，其Vmax分别为38.72×106和23.06×106U∙mg-1；其催化(−)-表儿茶素的Km值分别为3.49和3.24 mmol∙L-1，Vmax分别为38.72×106和23.06×106U∙mg-1。尽管BPox-2和BPox-3的肽质量指纹（PMF）不同，串联质谱分析显示，二者均具一个序列为TASLSAANSDLPSPFADLATLIAR的胰酶水解肽段。克隆得到的cDNA，大小为960 bp，共编码319个氨基酸。……