于天飞，谢鹏宇，孙婉姝，李 静，尹海畅，黎 明，于志丹

(1．齐齐哈尔大学 生命科学与农林学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006；2．黑龙江省抗性基因工程与寒地生物多样性保护重点实验室，黑龙江 齐齐哈尔 161006；3．齐齐哈尔大学 计算机与控制工程学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006)

番鸭细小病毒病是由番鸭细小病毒(Muscovyduckparvovirus，MDPV)引起的主要发生在3周内的雏番鸭的一种急性传染病，俗称番鸭“三周病”[1-3]。患病番鸭表现以腹泻、软脚和喘气为主要特征，发病率40%～50%，死亡率在50%～80%，对番鸭饲养业的危害极大[4-6]。MDPV为细小病毒科细小病毒亚科依赖细小病毒属成员，根据最新版ICTV病毒分类，MDPV 和与其亲缘关系密切的鹅细小病毒(Gooseparvovirus，GPV)[7]被列为单一种，即雁形目依赖细小病毒1[8]。MDPV 基因组为约5.1 kb的单链DNA，基因组两端为末端倒置重复序列(ITR)[9]。基因组包含2 个开放阅读框(ORF)，左侧ORF编码非结构蛋白NS，受P9启动子调控，通过对mRNA的选择性剪切可生成NS1以及NS2蛋白[10-11]；右侧ORF 编码结构蛋白VP，受P41启动子调控，通过对mRNA选择性剪切以及起始密码子的选择性使用可编码VP1、VP2 和VP3 3个结构蛋白[12-13]。有研究表明，鸭真核翻译延伸因子1(Eukaryotic translation elongation factor 1A1，eEF1A1)可与鹅细小病毒VP1蛋白产生相互作用，并参与了GPV的增殖过程[14]。NS蛋白作为调节蛋白与MDPV的复制增殖有关，推测其可能与宿主eEF1A1产生互作。本研究通过大肠杆菌表达MDPV YL08株NS1蛋白、北京鸭eEF1A1蛋白和浙东白鹅eEF1A1蛋白，并通过GST pull-down 进行了体外验证重组蛋白NS1与水禽eEF1A1的相互作用试验，旨在为MDPV与宿主细胞蛋白互作及其复制机制的研究奠定一定的理论和物质基础。

1 材料和方法

1.1 试验材料

1.1.1 菌种、质粒和抗体 质粒pET-32a、pGEX-6P-1，E.coli菌种DH5α和Rosetta(DE3)由齐齐哈尔大学动物免疫学研究室保存。……