乔连江，杨 森，张 萍，杨艳玲

(中国农业科学院特产研究所农业部经济动物疫病重点实验室，吉林长春 130122)

布鲁氏菌病(Brucellosis)又称布病、布氏杆菌病、马耳他热，是由布鲁氏菌属引起的一种常见的动物疫源性传染病，是世界上最古老的疾病之一[1-2]。布鲁氏菌(Brucella)是一种微小的球状、杆状或球杆状的革兰氏阴性兼胞内寄生菌，主要侵染单核-巨噬细胞，可引起人和多种家畜的慢性感染[3-4]。根据主要宿主的特异性、生化特性和抗原成分，把布鲁氏菌属分为10个种19个生物型，目前以羊种、牛种、猪种对人类和家畜的危害性最强[5]。人患病后多表现为大汗、反复高热并伴胸膜炎、关节炎和骨髓炎等继发症，家畜感染本病则常出现流产、空怀、繁殖成活率降低，给人类健康和畜牧业发展构成了巨大威胁[6-7]。

Ⅳ分泌系统(type Ⅳ secretion system，T4SS)是布鲁氏菌重要的毒力因子，由virB操纵子编码，基因序列高度保守，是横跨细菌内外膜的多蛋白复合物，对布鲁氏菌在宿主细胞内复制和存活必不可少的[8]。研究表明，Ⅳ分泌系统毒力作用主要依靠分泌的效应蛋白来实现，效应蛋白常作用于关键的信号通路分子，以多种方式帮助布鲁氏菌逃避宿主免疫监视进而在胞内建立持续性感染。Myeni S等[9-10]通过TEM-1和CyaA报告系统鉴定发现了效应蛋白BtpA和BtpB，已有研究表明，BtpA和BtpB是T4SS毒力依赖性效应蛋白。但BtpA和BtpB进入宿主细胞后如何调控核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路仍存在争议，以及与哪些宿主分子相互作用还有待挖掘。鉴于此，本研究以布鲁氏菌T4SS virB效应蛋白BtpA和BtpB基因为靶标，通过提取布鲁氏菌16M总RNA、反转录、PCR、酶切等构建真核表达载体，获得了具有活性的BtpA和BtpB效应蛋白，为进一步研究布鲁氏菌的致病机制奠定基础。……