刀筱芳，杨有文，傅 雪，杨发龙

(西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都 610041)

乳房炎是威胁山羊养殖最为常见的疾病之一，特别是随着养殖方式从传统的放养向规模化养殖的转变，其发病率提高，危害更为突出。

多种病原微生物与羊乳房炎的发生相关，其中主要以大肠埃希氏菌、葡萄球菌和链球菌为主，占乳房炎致病菌总数的80%～90%[1-2]，并具有经济和流行病学上的重要性。快速和准确的病原鉴定对于乳房炎的诊断和合理治疗至关重要[3]。由于传统的细菌分离鉴定过程费时耗力，无法作为常规手段用于山羊乳房炎的诊断。因此，PCR等分子生物学技术已成为诊断乳房炎的重要手段。采用PCR进行特异和敏感检测的前提条件是要从样本中制备良好的病原DNA。然而，由于不同的样本其成分存在很大差异，且常存在一些影响DNA提取效率的物质及抑制PCR扩增的因子，从而导致其敏感性下降[4]。因此，在利用PCR等分子检测技术对山羊乳房炎进行诊断和病原检测时，极有必要对羊乳中相关病原DNA的提取方法进行筛选和优化[5-7]。

本研究对3种方法提取山羊乳中致乳房炎病原菌基因组DNA的效果进行评价，特别是对后续PCR检测的影响进行了比较，以期为今后利用PCR等分子检测手段对羊乳房炎病原的检测提供方法学上的参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株及健康山羊乳 金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和大肠埃希氏菌为西南民族大学四川省高等学校重点实验室保存；健康山羊乳采集自无隐性及临床乳房炎的母羊，经细菌分离和鉴定为上述病原菌阴性。……