周先文，王晓清，王 佩，江 辉，曾 丹，彭英海

(1.湖南农业大学，湖南 长沙 410128；2.湘西州畜牧水产事务中心，湖南 吉首 416000)

中华鳖(Trionyxsinensis)是龟鳖目龟鳖科的代表动物，为中国的特色养殖品种，养殖产量位居世界第一，近年来我国学者对中华鳖的生长[1]、营养[2-4]、病害[5-6]和育种[7]等方面开展了大量的研究。中华鳖雄性生长普遍快于雌性，其雄性裙边厚，市场价格高于雌性，实行中华鳖雄性单性养殖能获得更好的经济效益[8]。根据水产动物的特性有针对性地进行育种研究，有利于提高相关产业的经济效益。在水产动物的性别研究中，硬骨鱼类的性成熟受脑-垂体-性腺轴的调节，下丘脑通过分泌激素到垂体促性腺细胞上，促进卵泡激素等的合成与释放，对性腺发育和配子形成等产生作用[9-10]。近来的研究表明，Dmrt1和Amh是中华鳖雄性的重要调控因子[8，11]，Cyp19a1和Foxl2为中华鳖卵巢的调节因子。然而，中华鳖的性别决定机制尚未阐明，中华鳖在自然生产过程中3龄达到性成熟，此阶段为性别相关基因高度表达阶段。通过差异表达基因的研究，可进一步验证中华鳖性别差异候选基因，探索其对性别决定的影响，对明晰中华鳖的性别决定机制有着十分重要的意义。

1 材料与方法

1.1 试验材料

2017年9月25日从常德市鼎城区河州龟鳖养殖专业合作社购买3龄中华鳖雌雄各6只，体重994.05～1 286.48 g。分别取中华鳖雌性的卵巢和雄性的精巢，每个个体取2份性腺组织样品放置于冻存管中，液氮速冻后置-80℃冰箱保存。

1.2 RNA提取及cDNA制备

解剖获得中华鳖精巢和卵巢组织，每个样品取2份，其中一份用于转录组分析，另一份进行RNA提取用于荧光定量PCR验证试验，RNA提取采用RNA提取试剂盒(OMGA，广州)，购自广州飞扬生物工程有限公司。……