栾宁，刘丹，刘畅，王新杨，侯阳，张晓妍△

随着糖尿病病程的延长，患者会出现学习记忆能力下降［1-2］，这与血糖控制不良有直接关系［3］。此外，糖尿病通常会增加患者痴呆的发病率［4］；也会导致海马神经元受损，包括细胞凋亡，进而引起认知障碍和记忆丧失［5］。研究发现，神经元凋亡与炎症、氧化应激联系紧密［6］。潜在转化生长因子β结合蛋白2（latent transforming growth factor beta binding protein2，LTBP2）属于细胞外基质蛋白家族的一员，与多种疾病中炎症、氧化应激形成有关［7-8］。但是，LTBP2 对糖尿病认知功能障碍的影响尚鲜见报道。本研究拟探讨LTBP2及其转导通路对糖尿病大鼠学习记忆的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 雄性SD 大鼠60 只，体质量180～220 g，购自锦州医科大学，动物生产许可证编号：SCXK（辽）2019-16。

1.1.2 试剂及仪器 链脲佐菌素（streptozotocin，STZ，Sigma）；LTBP2、Toll样受体4（Toll like receptor 4，TLR4）、核转录因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）、GAPDH 一抗（英国Abcam公司）；免疫组化试剂盒、TUNEL染色试剂盒、Western blot二抗、RNA提取试剂盒、反转录试剂及PCR试剂（北京碧云天公司）。正置显微镜（日本Olympus 公司），石蜡切片机（德国SLEE 公司），水平电泳仪、荧光定量PCR 仪（BIORAD），Morris 水迷宫（玉研仪器公司）。si-LTBP2 由上海吉玛公司设计合成，其反义寡核苷酸序列为5'-CCGCAACAACGCCAUCUAUTT-3'，对 照 序 列 为 5'-AUAGAUGGCGUUGUUGCGGTT-3'。

1.2 方法

1.2.1 动物分组及模型制备 45只大鼠腹腔一次性注射STZ 55 mg/kg，72 h后采尾静脉血测血糖，将血糖＞16.7 mmol/L的大鼠定为糖尿病模型，成模率为100%。模型诱导成功后，应用随机数字表法将大鼠分成3 组：糖尿病（DM）组、si-LTBP2组（大鼠海马给予腺病毒包装的针对LTBP2的siRNA 10 μL）、sc-LTBP2组（大鼠海马给予LTBP2对照序列10 μL），每组15只。另取15 只正常大鼠作为对照（CON）组。CON 组和DM组给予等剂量生理盐水。常规饲养，环境温度为20～25 ℃，湿度为50%～70%。……