蔡 睿，王振兴，安 南，贺云靖，杨文卓，王 星，许哲男*

（1.吉林大学临床医学院，长春 130012；2.吉林大学中日联谊医院胸外科，长春 130033）

肺癌是呼吸系统常见的一种恶性肿瘤，其发病率和致死率已经成为世界范围内的公共卫生问题[1]。非小细胞肺癌（NSCLC）是肺癌中常见的一种分型[2]。随着诊疗技术的发展和改进，NSCLC的总体生存率有所提升，但其5年生存率仍处于较低水平[3]。目前NSCLC发生早期远处转移的分子机制尚不清楚，研究[4]发现，外泌体介导的细胞间信号传导在肿瘤转移过程中发挥重要作用。本研究主要通过对NSCLC转移和非转移患者血清外泌体进行提取、分离、测序以及实验验证的方式，阐述血清中微小RNA（miRNA）对NSCLC早期转移潜在的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 外泌体提取和分离

随机收集就诊于我院胸外科的2例NSCLC转移患者全血10 mL，2例NSCLC未转移患者全血10 mL以及2例健康体检患者全血10 mL。同期选取30例NSCLC转移患者和30例NSCLC未转移患者进行实时定量聚合酶链式反应验证基因芯片准确性。4℃下1 900 g离心10 min，搜集上层血浆并在4℃下3 000 g离心15 min，搜集上清液进行外泌体提取。提取方法选择超高速离心法，即3 00 g条件下离心10 min，搜集上清并进行2 000 g条件下离心10 min，搜集上清并进行10 000 g条件下离心30 min，搜集上清并进行100 000 g条件下离心70 min，最终沉淀物即为外泌体。

1.2 外泌体的基因芯片测序

TRIzol法提取6例样本外泌体中的RNA，应用NanoDrop ND-1000进行RNA浓度和纯度的检测。用含T4连接酶的cyanine 3-pCp标记miRNA，通过浓缩和干燥标记的cRNA然后被重悬。在11 uL体积10×阻断剂和2.2 uL的25×裂解缓冲液中培养30 min并添加55 uL杂交缓冲液，最终清洗、固定和扫描。……