王贺双 纪 军 吴园园 潘艳艳 高雁艳 杨 晋 孙晓彤 张 利

（大连市中心医院中心实验室，大连116033）

非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是临床上常见的呼吸道肿瘤疾病之一［1］。有研究报道显示，NSCLC的发病率约占肺癌的85%以上［2］。流行病学发现，NSCLC的发病率呈现逐年上升趋势，临床中主要表现为胸部胀痛、咳血、低热、疲乏、体重减轻等［3］。NK细胞属于大颗粒T淋巴细胞，同时也是人体免疫系统重要的效应细胞，在患者的肿瘤的入侵过程中，具有预先致敏效果［4］。在对患者的治疗中，用于免疫治疗的NK细胞主要来自患者的外周血。临床研究发现，异体NK细胞的输注治疗效果优于自体输注。抗程序性细胞死亡蛋白1（programmed cell death protein 1，PD-1）治疗已经在血液肿瘤系统的治疗中得到确认［5］。PD-1主要表达于患者抗原呈递细胞，对于患者的免疫系统的调控具有负性作用。在对NK细胞的扩增过程中，PD-1阻断增强作用，对于患者的治疗具有积极的意义［6］。本研究通过对PD-1阻断增强体外扩增的NK细胞对NSCLC杀伤作用的研究，为临床诊断提供科学依据。

1 资料与方法

1.1 资料 本研究所采用的外周血单个核细胞主要来自健康人群的外周静脉血；NSCLC主要来自中国科学院的HCC827细胞。所有健康人群均签署知情同意书。将以上两种细胞接种于含有10%的胎牛血清的RPMI1640的培养基中，37℃，CO2培养箱孵育过夜，间隔1 d进行营养液更换。

1.2 方法

1.2.1 NK细胞的体外扩增90% NK培养液采用10%FBS、2 mmol∕L GlutaMAX、10 μg∕ml的青霉素进行混匀。将外周血单个核细胞置于离心管中，放入等量的Ficoll液体，形成明显的分离液体层。1 800 r∕min离心20 min，使用移……