王 娜 龚莉莉 叶春梅（武汉市妇女儿童医疗保健中心乳腺外科，武汉430014）

乳腺癌是世界范围内女性最常见的恶性肿瘤，其异质性和转移性导致患者死亡率居高不下［1］。研究乳腺癌发生和转移的机制，对其精准治疗具有重要意义。

研究表明，IL-17a（interleukin-17a）在部分乳腺浸润性导管癌组织中高表达，体外可促进乳腺癌MCF-7细胞的侵袭［2］。IL-17在乳腺癌血清样本中高表达，可促进乳腺癌进展［3］。miR-146在乳腺癌患者中表达下调并与乳腺癌的发生和恶化有关［4］，miR-146b-5可通过靶向抑制IL-6表达抑制乳腺间质成纤维细胞的致癌作用［5］。ZNRF2与甲状腺乳头状癌的发生有关［6］，参与miR-100抑制人骨肉瘤细胞增殖和耐药过程［7］，且抑制ZNRF2表达可抑制非小细胞肺癌生长［8］。而ZNRF2在乳腺癌中的表达和作用尚不明确，其与miR-146b-5p和IL-17a在乳腺癌中是否存在关系还未可知。

本研究假设miR-146b-5p和ZNRF2参与IL-17a诱导乳腺癌进展的过程，以期为乳腺癌的靶向治疗提供新的研究靶点。

1 资料与方法

1.1 资料 选取本院病理科资料完整、诊断确切的女性乳腺癌手术切除癌症组织20例和正常癌旁组织20例，患者年龄23～68岁，平均（45.4±9.6）岁，术前未进行放疗、化疗及免疫治疗。人乳腺癌细胞株MDA-MB-231购自美国ATCC；DMEM高糖培养基和胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）购自美国Gibco公司；胰蛋白酶、二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）和四氮唑蓝（thiazolyl blue tetrazolium bromide，MTT）购自美国Sigma-Aldrich公司；IL-17a抗体、ZNRF2抗体、MMP-2抗体、MMP-9抗体、STAT3抗体、p-STAT3抗体和β-actin抗体购自英国Abcam公司；引物、miR-146b-5p模拟物（miR-146b-5p）、miR-146b-5p抑制剂（anti-miR-146b-5p）、ZNRF2抑制物（si-ZNRF2）、阴性对照（miR-con、anti-miR-con、si-con）及双荧光素酶ZNRF2突变和野生型载体购自上海吉玛制药有限公司；双荧光素报告基因检测试剂盒酶购自上海碧云天生物技术有限公司；……