石云锋 师小函 梁晶晶 陈健宁 江振友 吴本权（中山大学附属第三医院，广州510630）

甲型流感病毒（甲流病毒）引起流行性感冒为主的呼吸系统急性感染性疾病，但病毒性肺炎在甲型流感大流行时发病率明显增高，并且在病程1周时易进展为重症病毒性肺炎或继发细菌性肺炎，病死率高［1-2］。甲流病毒感染激活肺泡巨噬细胞等免疫细胞中的NOD样受体蛋白3（NOD like receptor protein 3，NLRP3）炎症小体，后者引起IL-1β、IL-18的释放并介导炎症反应，该免疫反应是机体抗甲流病毒感染的主要机制［3］。在甲流病毒肺炎早期，NLRP3炎症小体的激活及介导的炎症反应有助于病毒的清除［4］。但在甲流病毒肺炎病程1周时，即进展至重症肺炎的高风险时期，NLRP3炎症小体具体活性如何，国内外未见深入研究。本研究以甲流病毒鼠肺适应株H1N1/FM1滴鼻感染C57BL/6小鼠建立肺炎模型，探索NLRP3、caspase-1、IL-1β的表达水平以及相应的炎症反应。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验病毒及动物 甲流病毒H1N1/FM1株为鼠肺适应株，前期研究证实其引起小鼠病毒性肺炎的致病力［5］。C57BL/6小鼠15只，雄性，鼠龄30～35 d，购于广东省实验动物中心，许可证号：SCXK（粤）2013-0002。动物实验过程遵循《赫尔辛基宣言》相关原则及动物伦理要求。

1.1.2 主要试剂MLV第一链合成试剂盒、SYBR®select master mix购于美国Life Technologies公司；RT qPCR引物由美国Life Technologies公司设计并合成；NLRP3单克隆兔抗体购于美国Cell Signaling Technology公司；caspase-1单克隆兔抗体购于美国Novus Biologicals公司；GAPDH兔抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗、全蛋白提取试剂盒及BCA法蛋白浓度检测试剂盒购于广州杰特伟科技有限公司；ELISA试剂盒购于美国R&D公司。……