左 强 欧云生 余浩洋 钟申熹 张木子（重庆医科大学附属第一医院骨科，重庆400016）

骨肉瘤是青少年常见的骨原发恶性肿瘤之一，伴随着医疗技术的进步及新辅助治疗出现，患者的总体生存率有所提高，但骨肉瘤复发和转移仍是治疗的难题［1-2］。光动力疗法（photodynamic therapy，PDT）作为一种治疗时间窗短、毒副反应小、可重复治疗的新型治疗恶性肿瘤的方法，已广泛运用于临床相关恶性肿瘤的治疗［3-4］。

葡萄糖调节蛋白78（glucose regulated protein 78，GRP78）是一种关键的内质网管腔内分子伴侣，具有强大的抗凋亡特性，在多种恶性肿瘤中高表达，与肿瘤的增殖和存活密切相关［5-7］；此外，有研究表明，GRP78也是肿瘤细胞抗性的关键调节因子，与肿瘤的耐药、复发及转移密切相关［8-9］。在乳腺癌及结肠癌研究中发现，沉默GRP78表达可增强肿瘤细胞对放化疗的敏感性［10-11］，但GRP78在PDT治疗骨肉瘤中的研究较少。本研究将运用siRNAGRP78干扰人骨肉瘤细胞HOS中GRP78的表达，并探讨其对焦脱镁叶绿酸-α甲酯介导的光动力疗法（MPPα-PDT）作用下HOS细胞增殖活性、凋亡水平及Wnt通路的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞与试剂 人骨肉瘤HOS细胞株购自中国科学院上海细胞库。焦脱镁叶绿酸-α甲酯（pyropheophorbide-α methyl ester，MPPα）购于美国Sigma公司；胎牛血清、高糖DMEM细胞培养基等均购自美国Gibco公司；胰蛋白酶、Lipo8000TM转染试剂及Hoechst凋亡试剂盒均购于上海碧云天生物技术有限公司；Annexin V-PI双染检测试剂盒购于江苏凯基生物技术股份有限公司；CCK-8试剂盒购自上海MedChemExpress公司；PCR引物由上海生物工程有限公司合成；RNA提取试剂购自北京天根生化科技有限公司；……