刘 近，任雪建，杨 转，姬杰菲

(禾旭(郑州)生物技术有限公司，河南 郑州 450000)

0 引言

牛传染性鼻气管炎(Infectious Bovine Rhinotracheitis，IBR)是由牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus，IBRV)引起的一种牛的传染病，表现为上呼吸道感染及气管黏膜炎症，呼吸困难，一般伴随着发热、沉郁、食欲不振、流产和产奶量下降等症状[1]。牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)所有蛋白中gB、gC、gD和gE 4个糖蛋白是IBRV的主要抗原，而gD蛋白被认为是刺激机体产生中和抗体的主要糖蛋白，它不但能诱导体液免疫，还可诱导细胞免疫[2]，是目前IBRV特异性诊断的主要抗原。

该病呈世界性流行，我国部分地区也多有发生。IBR被国际兽疫局(OIE)列为B类疾病，在我国《中华人民共和国进境动物检疫疫病名录》中也被列为二类传染病[3]。牛传染性鼻气管炎病毒危害巨大，加强牛传染性鼻气管炎病毒的实验室检测有助于疾病的早期诊断和防治[4]。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1)试剂与样品。牛传染性鼻气管炎gD重组蛋白(公司实验室保存)、IBRV单克隆抗体(公司实验室保存)、牛血清样本(公司采集的临床样本)、比对试剂盒(购自IDEXX公司)。

2)主要仪器设备:酶标仪(购自Thermo)、恒温培养箱(购自林茂科技(北京)有限公司)、冰箱(青岛海尔生物医疗股份有限公司)、离心机(上海菲恰尔分析仪器有限公司)、移液枪(赛默飞)。

1.2 结果判定

当S/N≥0.5时，判定为阴性；当S/P<0.5时，判定为阳性。

1.3 试验条件的确定

1)对包被液的初步筛选。按照实验步骤进行试验，封闭液用1.5%Casein、包被抗原用牛传染性鼻气管炎病毒gD重组蛋白、酶标标记牛传染性鼻气管炎病毒的单克隆抗体，在以上条件的工作浓度均为为1/1 000的情况下，分别选用CB、1/10CB、0.2M PB、0.02M PB、0.01M TB为包被液进行试验，试验结果如表1所示。……