袁清敏 冯保静 王国庆 刘会娟 王献利

牙周炎作为一种高发病率的慢性炎症疾病，是成年人牙齿脱落的主要原因［1，2］。近年来PDLSCs已被证明在小鼠移植时可形成异位牙骨质/韧带样复合体［3］。因此，研究炎症微环境下PDLSCs成骨分化的分子机制具有重要意义。研究表明，肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor-α，TNFα的过度释放会导致牙周和骨组织的损伤，如牙槽骨缺损、牙槽窝缺损、牙支持组织缺损等［4］。此外，研究证实TNFα可抑制牙周膜干细胞的成骨向分化［5］。因此，深入研究炎症微环境下hPDLSCs成骨向分化的调控机制在牙周膜干细胞的临床应用具有重要作用。

MicroRNAs(miRNAs）已被证明参与调节人骨髓间充质干细胞的成脂和成骨分化［6］。我们前期研究也发现miR-203可通过靶向调控RUNX2进而抑制牙周膜干细胞成骨向分化能力［7］。然而炎症状态下miR-203对hPDLSCs成骨向分化的影响及其作用机制尚不明确。研究证实miR-203通过抑制TNFα及IL-24促炎因子的表达，从而抑制皮肤免疫反应［8］，表明在细胞分化过程中TNFα和miRNA之间存在潜在调控关系。因此，我们推测miR-203可能通过调控TNFα参与炎症状态下hPDLSCs的成骨分化。本研究将探索miR-203在炎症微环境下对PDLSCs成骨向分化能力的影响及其机制，以期为牙周炎骨缺损提供新的机制和潜在的治疗靶点。

1.材料和方法

1.1 实验材料 胎牛血清（Gibco，美国）；胰蛋白酶（Hyclone，美国）；TNFα（Peprotech，美国）；α-MEM培养基（Hyclone，美国）；低温高速离心机（Eppendorf，德国)，酶联免疫检测仪（BIO-TEK，美国）；离心机（Eppendorf，德国）；Ⅰ型胶原酶、地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C(Sigma，美国)，RUNX2、ALP、OCN、OPN、TNFα及β-actin引物（生工，中国)，cDNA合成试剂盒、SYBR Green试剂盒（Takara，日本)；miR-203 mimics、miR-203 inhibitor(锐博，中国)；……