洪照微，王沛，彭慧凤，杜子成，魏文如，陈小庆

（江西农业大学动物科学技术学院，江西南昌330045）

随着生活水平的提高，人们对畜禽类产品要求也逐渐提高，愈发追求于绿色、安全、健康的畜禽产品，土鸡、土鸡蛋也因此越来越受人们的喜爱[1]。散养家禽更容易感染寄生虫，因为散养模式使家禽接触寄生虫病原的机会更大，而且养殖户缺乏专业养殖技术，对疾病预防意识较差[2]。家禽被寄生虫感染所引起的疾病大多呈慢性经过且临床体征不明显，容易被养殖户忽略[3]。鸡感染寄生虫尤其是肠道寄生虫会导致鸡食欲下降、腹泻、生长缓慢、产蛋量下降等一系列症状，严重影响鸡群的健康状况，同时给养禽业也带来巨大的经济损失[4～5]。本实验采用粪便检查技术和动物蠕虫学完全剖检技术等检查方法对散养鸡体内外寄生虫感染情况进行调查，收集散养鸡体内蠕虫并进行计数和鉴定，为南昌地区散养鸡体内外寄生虫病的流行情况、寄生虫病防治提供科学依据。

1 材料与方法

1．1 实验材料

1.1.1 实验器材。剪刀、手术刀、手术剪、搪瓷方盘、搪瓷杯、平皿、显微镜、放大镜、载玻片、胶头滴管、生理盐水、75%酒精、DH5α感受态细胞、T载体、琼脂粉、酵母粉、胰蛋白胨、氯化钠、PCR仪、电泳仪、DNA提取试剂盒。

1.1.2 试验动物。5只农户散养鸡，购自南昌市青山湖区某农贸市场。

1.2 实验方法

1.2.1 体表寄生虫检查。取散养鸡的羽毛，先肉眼结合放大镜仔细观察，将疑似有虫体的毛发置于载玻片上，滴加两滴生理盐水后置于低倍显微镜下观察，若发现虫体可用镊子采集并浸泡于75%酒精中。

1.2.2 动物蠕虫学完全剖检技术。将家禽处死后解剖，观察内脏器官表面有无寄生虫和病变，再逐一取其内脏器官放于不同的搪瓷杯中进行检查。最后将在体内各器官脏器中收集到的虫体置于生理盐水中简单冲洗后于无水乙醇中保存备用。

1.2.3 粪便寄生虫检查。取散养鸡的直肠新鲜粪便，采用直接涂片法和饱和盐水漂浮法进行寄生虫检查。

1.2.4 分子生物学鉴定。对所收集的蠕虫用组织DNA提取试剂盒进行虫体总DNA提取，将提取的DNA作为模板，分别用线虫、绦虫ITS基因通用引物NCf、NCr[6]，BDf、BDr[7]进行PCR扩增，对PCR产物进行凝胶电泳检测。再将PCR扩增产物进行胶回收，将胶回收产物进行克隆测序，将测得序列提交至NCBI网站进行比对分析，并上传序列至Gen-Bank数据库。

表1 线虫和绦虫的ITS引物序列

2 结果

2.1 体表寄生虫检查结果

通过对家禽体表毛发以及皮肤的寄生虫检查，发现5只被检鸡的羽毛上都存在很多羽虱和皮刺螨，感染率为100%，具体虫体形态如图1所示。

图1 体外寄生虫

2.2 体内寄生虫检查结果

通过对5只鸡的内脏器官进行检查，在5只鸡的消化道（以小肠和盲肠居多）中均发现大量线虫和绦虫，统计发现线虫28条，绦虫27条，如图2所示。

图2 消化道寄生虫

2.3 粪便寄生虫卵检查结果

通过直接涂片法和饱和盐水漂浮法对5只鸡的直肠粪便进行检查，结果在5只鸡的直肠粪便中发现了球虫卵囊、蛔虫卵、禽毛细线虫卵、异刺线虫卵、四棱线虫卵及绦虫卵，如图3所示。

图3 粪便寄生虫虫卵

2.4 分子生物学鉴定结果

本实验共收集到55条蠕虫，其中禽毛细线虫是通过肠黏膜刮片观察到的，通过虫体内部虫卵形态判断为禽毛细线虫，并未收集虫体。使用组织总DNA提取试剂盒对55条蠕虫提取DNA，再使用ITS基因通用引物进行PCR扩增和凝胶电泳检测，可观察到1 000bp及1 800bp左右的目的条带，无非特异性条带，与预期结果相符。将PCR产物胶回收并克隆测序，将测序结果进行对比分析并上传序列至GenBank。55条蠕虫经测序分析比对分析后发现，有24条属于鸡蛔虫（上传的GenBank登录号为MW218962-MW218965）、4条为异刺线虫（上传的GenBank登录号为MW403874）、有24条为有轮赖利绦虫（上传的GenBank登录号为MW291960-MW291962）、1条为缩小膜壳绦虫、1条为四角瑞利绦虫（上传的GenBank登录号为MW291975），1条为棘沟赖利绦虫。

图4 虫体ITS序列PCR扩增电泳图

2.5 寄生虫感染情况分析

在体表寄生虫检查中，5只鸡体表均发现皮刺螨和羽虱，感染率为100%。体内寄生虫检查，发现5只鸡体内均存在数量不等的线虫、绦虫，其中蛔虫、绦虫感染率为100%，异刺线虫感染率为80%，禽毛细线虫感染率为20%。通过粪便寄生虫卵检查发现，5只实验鸡粪便中均存在蛔虫卵、异次线虫卵、绦虫卵及球虫卵囊，感染率为100%；3只鸡粪便中发现禽毛细线虫卵，感染率为60%；1只鸡粪便中发现四棱线虫卵，感染率为20%。比较体内寄生虫检查结果与粪便寄生虫卵检查结果，可以看出结果大体上是一致的，但也稍有不同，这可能与体内感染的虫体数量等相关。

表2 鸡体内外寄生虫感染情况

表3 鸡体内寄生虫虫卵情况

3 讨论

散养鸡对蛔虫及绦虫等消化道寄生虫普遍易感。李新春等对陕西榆林市散养鸡寄生虫进行调查[8]，发现该地区散养鸡主要感染异刺线虫、蛔虫、绦虫及羽虱。朱瑞平等调查福建上杭县散养鸡寄生虫感染情况也显示该地区散养鸡羽虱、蛔虫、绦虫的感染率高[9]，这些调查结果与本研究结果接近。扬州地区散养鸡寄生虫感染情况的调查结果显示主要感染寄生虫为螨虫和球虫[10]。云南无量山散养鸡肠道寄生虫检查结果显示，主要感染寄生虫为球虫和蛔虫[11]。这些研究结果表明，各地区散养鸡感染的体外寄生虫大多为羽虱、螨虫；体内寄生虫主要为线虫、绦虫、球虫等，但不同地区其优势虫种不同，这可能与所调查的地区、气候、品种、饲养管理等因素有关。

针对线虫及绦虫，现如今国内较为常用的治疗方案是使用左旋咪唑、阿苯达唑等药物拌料口服，同时会在饮水中添加电解多维等增强动物免疫力[12～13]。而欧洲许多国家由于对抗生素类药物使用管理严格，只有苯丙咪唑类药物可用于蛋鸡线虫感染的治疗，农场普遍使用合成驱虫剂（主要成分为甲苯达唑等苯丙咪唑类药物）对寄生虫病进行一定的预防。目前较前沿的防治线虫的方法为靶向治疗[14]，也有相关研究表明通过靶向治疗策略的应用，可以获得更好的生产性能[15]。

羽虱、皮刺螨等体表寄生虫是散养鸡中感染率较高的寄生虫，多发于夏季[16]，尤其是阴暗、潮湿的饲养环境下的鸡最易感染。若引起大规模感染，严重可造成鸡群大面积死亡，给养殖户带来较大的经济损失[17]。近些年有研究发现惰性粉尘与真菌白僵菌的干燥分生孢子对皮刺螨具有潜在的防治作用[18]，植物精油如香芹酚和百里香酚对螨虫也有一定毒性作用[19～20]。这些天然成分药物效果好，不易产生耐药，但成本高，尚未普及。防控体表寄生虫，更重要的在鸡群的日常饲养管理。养殖户应当做好日常鸡舍的消毒和清理工作，注意养殖场周围环境问题，防止因鸡舍环境问题造成鸡群体表寄生虫大规模感染[21]。养殖户还应当定期对鸡群进行驱虫。针对体表寄生虫，可以用溴氰菊酯等喷洒鸡舍进行预防，也可喷洒在鸡群身上，与环境同时进行杀虫。对于患病鸡可用0.1%敌百虫等药物喷洒在患部，能达到很好的治疗效果[22]。

综上所述，南昌地区五只散养鸡在体表、体内均存在寄生虫感染，其中羽虱、皮刺螨、蛔虫、绦虫、球虫的感染率为100%；异刺线虫感染率为80%；毛细线虫感染率为60%；四棱线虫的感染率为20%。由此可见南昌地区散养鸡寄生虫感染情况较为严重，应重点加强对体表寄生虫（羽虱、皮刺螨等）、球虫、线虫以及绦虫的防治。