★ 李莹 黄金穗 徐媛 熊之琦 张志红 叶喜德（.江西中医药大学附属医院 南昌0006；.南昌医学院 南昌 0004；.江西中医药大学 南昌 0004；4.江西省儿童医院 南昌0006）

蚕砂来源于蚕蛾科昆虫家蚕（Bombyx moriL.）幼虫的干燥粪便［1］，别名蚕矢，临床常以晚蚕之屎质佳，又称晚蚕砂，或原蚕砂。其味甘辛、性温，入肝、脾胃经，具祛风除湿，和胃化浊，活血通络之功。蚕砂临床应用历史悠久，始载于《名医别录》曰：“主肠鸣，热中消渴，风痹，瘾疹。”［2］从历代本草的记载来看，蚕砂主治半身不遂、中风、肠鸣、消渴症、血崩和血虚等。蚕砂主含生物碱类、黄酮类、木质素类、萜类、氨基酸、植醇和叶绿素盐及其他等，具有抗肿瘤、保肝、抗病毒、补血、抗炎和抗菌等多种药理作用［3-5］。

蚕砂临床应用广泛，在经验处方中，许多医者常用蚕砂炒炭与其他药物合用，用于治妇科疾病［6］。如《本草纲目》云“治消渴，癥结，及妇人血崩”，《儒门事亲》载“妇人病证第七，治血崩，上为末”等。临床实践证明［7］，蚕砂炒炭后治疗妇女血崩取得良效。除单味药使用外，蚕砂炒炭与其他中药如鹿角霜、杜仲、桂枝等配伍而成的蚕砂固经汤，止血效果显著。然而，蚕砂的这种炮制作用变化，目前文献只是局限于处方配伍中的协同作用，虽然对化学成分和复方应用研究较多［8-10］，但涉及蚕砂炒炭等炮制方面的研究较少。基于此，本研究借助现代研究手段和方法，开展蚕砂炒炭止血方面的研究，通过研究炒炭前后对小鼠出血时间和凝血时间的影响，来探讨蚕砂止血作用机理，并为深入研究蚕砂提供数据支撑。

1 材料

1.1 实验动物 昆明种小鼠SPF级70只，体质量（18±2）g，雄性，济南朋悦实验动物繁育有限公司提供，许可证号：SCXK（鲁）2014－0007。

1.2 实验试剂与仪器 蚕砂（代富安虫草参茸行，批号：1892013），经江西中医药大学龚千锋教授鉴定为蚕蛾科昆虫家蚕（Bombyx moriL.）幼虫的干燥粪便。0.9 %氯化钠溶液（江西科伦药业有限公司，批号C219011903-2）。 JY12001型电子天平（d=0.1 mg，上海衡平仪器仪表厂）；C21-RT2140型电磁炉（美的集团）；HH-6数显恒温水浴锅；帆船牌载玻片（25.4 mm×76.2 mm）；小鼠灌胃器、注射器、手术剪、滤纸等常规实验室用品。

2 方法

2.1 供试品制备 生品制备：分别称取蚕砂20.0 g、30.0 g、40.0 g，用纱布包好，置于烧杯中，加入10倍量的水，放置在95 ℃的水浴锅中加热30 min，过滤，往烧杯中加入8倍量的水，加热20 min，合并两次煎煮液，减压过滤，在水浴锅中加热浓缩到40 mL，制备得蚕砂生品低、中、高各剂量的浓度，分别为0.5、0.75、1.0 g/mL。

炒炭品制备：称取蚕砂210.0 g，用武火（160 ℃，1 000 W）分7次炒，每次30.0 g，炒至外表焦黑色，倒入铁盘中平摊，放凉，得到蚕砂炒炭品137.4 g，得率65.4 %。依照生品供试品的制备方法，制备得炒炭品药液，炒炭品低、中、高药液浓度与生品相对应。

2.2 动物分组与给药 动物分组：昆明种SPF级雄性小鼠70只，体质量（18±2）g，随机分为7组，每组10只，分别为空白组，蚕砂生品低、中、高各剂量组，蚕砂炭品低、中、高各剂量组（低、中、高各剂量组浓度分别0.5、0.75、1.0 g/mL）。

给药：各剂量组按照体质量灌胃给药，给药量为0.4 mL/20 g，连续5 d，每天灌胃给药1次。空白组给予等量的生理盐水，在灌胃前用水浴锅把药液加热到常温。

2.3 小鼠出血时间测定 第5天给药结束1 h后，在距离尾尖3 mm处剪去小鼠尾巴，有血液流出时开始计时，每隔10 s用滤纸轻轻拭血1次，直至拭后不再出血为止，所用时间为出血时间。

2.4 小鼠凝血时间测定 第5天给药结束1 h后，用手术剪减去小鼠的睫毛和胡须，防止毛发中的蛋白质融入血液中。将预先准备好的毛细管，从小鼠右眼内眦球后静脉丛处插入，直至有血液泵出，并于此时开始计时，至血液充满整个毛细管为止。抽出毛细管，取棉球擦拭小鼠眼部，按压约30 s，防止血液外溅。将含有整管血液的玻璃毛细管平放于试验台上，每隔10 s于适当位置折断，并缓慢向左右两侧拉开，观察折断面是否有血凝丝，重复多次，直到有明显的血凝丝出现为止，停止计时，所用时间即为凝血时间。

2.5 统计学方法 采用SPSS 22.0软件进行统计分析，数据均采用均数±标准差（）表示，组间比较采用单因素方差分析。P＜0.05 为组间差异有统计学意义。

3 结果

3.1 对小鼠出血时间的影响 与空白组对比，蚕砂炭品低、中、高各剂量组的出血时间明显减少，组间差别具明显统计学意义（P＜0.01），其中以高剂量组减少尤为明显，其次为中剂量和低剂量组，说明蚕砂炒炭对小鼠出血时间的影响，与剂量存在关联。蚕砂生品低、中、高各剂量组稍微升高，但差异不具统计学意义（P＞0.05）。具体见表1。

表1 各组小鼠出血时间的比较（，n=10）

表1 各组小鼠出血时间的比较（，n=10）

注：与空白组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

组别 药液质量分数/g .mL-1 出血时间/s空白组 - 455.41±17.38蚕砂生品低剂量组 0.5 459.63±26.60蚕砂生品中剂量组 0.75 463.60±18.54蚕砂生品高剂量组 1.0 459.45±28.89蚕砂炭品低剂量组 0.5 338.83±28.11**蚕砂炭品中剂量组 0.75 256.64±28.19**蚕砂炭品高剂量组 1.0 211.31±27.13**

3.2 对小鼠凝血时间的影响 与空白组对比，蚕砂炭品低、中、高各剂量组凝血时间明显减少，组间差异均具明显统计学意义（P＜0.01），并随着剂量的增大，凝血时间减少越明显。蚕砂生品低剂量组凝血时间减少，但不具统计学意义（P＞0.05），生品中、高剂量组略有升高，但均不具统计学意义（P＞0.05），蚕砂炭品各剂量组与生品各剂量组的差别具明显统计学意义（P＜0.01），具体见表2。

表2 各小组凝血时间的比较（，n=10）

表2 各小组凝血时间的比较（，n=10）

注：与空白组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

组别 药液质量分数/g .mL-1 凝血时间/s空白组 - 153.56±13.29蚕砂生品低剂量组 0.5 151.96±20.80蚕砂生品中剂量组 0.75 165.28±20.40蚕砂生品高剂量组 1.0 160.88±15.72蚕砂炭品低剂量组 0.5 112.85±12.56**蚕砂炭品中剂量组 0.75 105.20±12.95**蚕砂炭品高剂量组 1.0 64.39±13.42**

4 讨论

资料表明，蚕砂炒炭品在复方应用中具止血之效，常用于功能性子宫出血［11］，但这种作用是由于蚕砂单味药作用，还是协同作用，仍缺乏现代研究基础。且在现代应用中多见于生品，炒炭品在中药炮制法中并不常见。目前对中药止血药理作用研究，主要考察对受试动物出血时间和凝血时间的影响。由于出血时间与毛细血管、血小板的功能和数量、纤溶等因素有关，反映的是止血状态；凝血时间主要与各种凝血因子的含量和功能有关［12-13］。

基于此，本文通过考察蚕砂炒炭前后对小鼠出血时间和凝血时间的影响，以研究其炒炭后的止血作用，以便为蚕砂在复方应用提供理论依据。本研究发现，蚕砂生品对小鼠出血和凝血作用影响甚少，但炒炭后可明显缩短小鼠的出血时间和凝血时间，其中蚕砂炭高剂量组对小鼠出血时间和凝血时间影响最大，说明蚕砂经炒炭后具有明显的止血功效。这对于从炮制角度来研究蚕砂的临床应用，意义重大。但这种作用机理还需进一步研究，希望本文能为深入研究蚕砂提供基础。