岑兴 廖楚航 费伟 周昊

实体肿瘤生长的微环境通常是乏氧环境，这有利于细胞因子的释放促进血管生成从而导致肿瘤的进程加快[1]。乏氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α)是乏氧环境中重要的信号传导分子,它可以调控基因的表达产生一系列生物学效应促进肿瘤发展，包括血管生成、细胞增殖、凋亡、糖酵解和pH调节[2]。之前的研究发现，在多种肿瘤的生长和转移中发现HIF-1α的异常表达，包括口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)[3-4]。

在本研究中，通过实时定量PCR(RT-PCR)、Western blot检测了OSCC临床标本中HIF-1α的mRNA和蛋白表达情况，使用RNA干扰(RNA interference,RNAi)下调HIF-1α在OSCC动物模型中的表达，观察肿瘤生长情况，检测HIF-1α和VEGF的表达水平，同时检测了肿瘤细胞的凋亡情况和微血管密度(microvascular density,MVD)。初步探寻HIF-1α在OSCC发生和发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 肿瘤标本的检测

实验组标本来自四川省人民医院颌面外科2019 年01 月～2019 年06 月手术切除的新鲜肿瘤组织(12 例)，年龄60～82 岁，所有患者病理证实均为OSCC；对照组为术中冰冻病理结果证实无肿瘤细胞浸润的正常组织。所有患者均签署知情同意书,本研究获得四川省人民医院伦理委员会的批准。

1.2 RT-PCR 检测

取保存的肿瘤组织样本12 例，分别磨碎后加入Trizol(50 mg 组织加入1 ml)抽提RNA，并用RevertAidTM试剂盒(Thermo，USA)逆转录成cDNA;取逆转录产物进行实时荧光定量RT-PCR(ABI Prism 7700，USA)。

1.3 Western blot检测

使用蛋白提取试剂盒(北京索莱宝)提取肿瘤组织蛋白，BCA蛋白检测试剂盒(Pierce，USA)测定蛋白浓度。蛋白变性后，冷却上样，凝胶电泳半干法转入PVDF膜后置于封闭缓冲液(摇床振荡1 h)，分别加入目标基因一抗(1∶10 000，cell signaling technology，USA) ，4 ℃过夜，TBS/T洗涤后孵育二抗，ECL显影条带并进行灰度分析(Bio-Rad，USA) 。……