刘怡菲

(辽宁省林业科学研究院，辽宁 沈阳 110032)

软枣猕猴桃Actinidiaarguta属猕猴桃科，是大型落叶藤本植物。软枣猕猴桃含有多种功能性成分，如黄酮、多糖、多酚和花青素等，是富含优质营养物质的食疗果实[1-3]。同时软枣猕猴桃具有丰富的药用价值，其活性成分能够强身健体[4-6]。多糖，广泛存在自然界，是具有重要生理功能的天然大分子物质，软枣猕猴桃多糖逐渐受到消费者青睐[7-8]。本研究以软枣猕猴桃多糖为对象,通过对小鼠进行灌胃软枣猕猴桃多糖，分析小鼠外周血中总T细胞、总B细胞、辅助T细胞、毒性T细胞和NK细胞变化情况，为软枣猕猴桃多糖对小鼠免疫系统影响的进一步研究提供理论基础及科学指导。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验材料为购于辽宁长生生物技术有限公司的6周龄雌性小鼠，共20只，将小鼠随机分为试验组和对照组，对照组即健康小鼠，试验组即软枣猕猴桃多糖灌胃处理小鼠。试验组和对照组小鼠均饲养于无菌动物房中，动物房中设置12 h光/暗环境交替处理，自由饮水，汲食。

软枣猕猴桃多糖制备：参照王美月等[9]方法，采取超声辅助乙醇提取法制备软枣猕猴桃多糖。取软枣猕猴桃粉末5 g，超声提取一定时间，待提取液回收浓缩至原体积的1/10时，加10倍体积的乙醇，静置12 h，离心，干燥，取适量热水超声溶解，100 mL容量瓶定容，取上清液1.0 mL，干燥后提取多糖，反复多次重复上述步骤制备多糖。

1.2 试验方法

1.2.1 软枣猕猴桃多糖灌胃处理

软枣猕猴桃多糖处理组：每只小鼠灌胃200 μL制备好的软枣猕猴桃多糖(4 mg·mL-1)；对照组：每只小鼠灌胃200 μL无菌水。两组小鼠每日灌胃1次，连续灌胃7 d。

1.2.2 外周血收集和免疫细胞分离

采用面静脉采血法收集小鼠外周血，采血时间分别为0、7、14和28 d。外周血采集后用红细胞裂解液裂解红细胞，PBS磷酸盐缓冲液清洗2次，收集淋巴细胞。用流式细胞仪进行检测，用FlowJo软件进行结果分析。

2 结果与分析

2.1 软枣猕猴桃多糖灌胃处理对总T细胞和总B细胞的效应

从图1可以看出，软枣猕猴桃多糖灌胃处理7天后，试验组总T细胞比例与对照组没有明显差异。然而，第14天检测发现，外周血中总T细胞比例明显上升，此时试验组总T细胞比例为55.01%±3.17%，对照组为45.23%±0.21%，两者差异显著(P<0.05)。第21天，试验组小鼠外周血中总T细胞含量降低至49.15%±1.26%，与对照组46.23%±0.77%没有显著差异(P>0.05)。因此，软枣猕猴桃多糖灌胃处理对小鼠外周血中总T细胞比例有短暂的促进作用。

软枣猕猴桃多糖灌胃处理7 d后，试验组外周血中总B细胞比例明显下降，试验组总B细胞比例为18.77%±2.13%，对照组为27.81%±0.15%，两者差异显著 (P<0.05)。第14天检测发现，试验组小鼠外周血中总B细胞含量降低至14.86%±1.25%，与对照组31.23%±0.73%没有显著差异(P>0.05)。因此，软枣猕猴桃多糖处理对小鼠外周血中B细胞比例有着长效的抑制作用。

图1 灌胃处理对小鼠外周血中总T细胞和总B细胞的效应

2.2 软枣猕猴桃多糖灌胃处理对辅助T细胞和毒性T细胞的效应

从图2可以看出，软枣猕猴桃多糖灌胃处理7 d后，试验组外周血中辅助T细胞比例明显上升，试验组总T细胞比例31.022%±1.24%，对照组26.25%±1.25%，两者差异显著(P<0.05)。14 d时，试验组小鼠外周血中辅助T细胞含量升至42.88%±1.32%，与对照组31.25%±0.35%差异不显著(P>0.05)。因此，软枣猕猴桃多糖灌胃处理对小鼠外周血中辅助T细胞比例有短暂的促进作用。

图2 灌胃处理对小鼠外周血中辅助T细胞和毒性T细胞的效应

软枣猕猴桃多糖灌胃处理7 d后，试验组毒性T细胞比例为12.13%±0.56%，健康对照组为9.56%±0.21%，两者差异显著 (P<0.05)。14 d，试验组毒性T细胞含量升高至14.11%±0.28%，与对照组13.56%±0.13%无显著差异 (P>0.05)。因此，软枣猕猴桃多糖处理对小鼠外周血中毒性T细胞比例有长效的抑制作用。

2.3 软枣猕猴桃多糖灌胃处理对NK细胞的效应

软枣猕猴桃多糖灌胃处理7 d后，试验组外周血中NK细胞比例有所上升，试验组毒性T细胞比例为26.32%±0.23%，对照组为23.95%±0.17%，两者差异不显著(P>0.05)。14 d试验组小鼠外周血中NK细胞含量升高至29.56%±0.48%，与对照组18.98%± 0.46%差异显著(P<0.05)。因此，软枣猕猴桃多糖处理对小鼠外周血中NK细胞的比例有着一个延迟且瞬时的促进效应。

图3 灌胃处理对小鼠外周血中NK细胞的效应

3 结 论

本研究结果显示软枣猕猴桃多糖对小鼠外周血中不同类型免疫细胞有显著的差异效应。软枣猕猴桃多糖灌胃处理之后T细胞的比例逐渐升高然后下降至接近未处理组水平，然而B细胞的比例剧烈下降而后缓慢恢复。软枣猕猴桃多糖连续灌胃处理7天后，小鼠外周血中B细胞含量降低，外周血中总T细胞的比例在软枣猕猴桃多糖灌胃处理1周后明显增加，这表明软枣猕猴桃多糖对T细胞的增殖分化有着瞬时的促进作用。软枣猕猴桃多糖刺激毒性T细胞和辅助T细胞的合成，因此推测软枣猕猴桃多糖可能有利于机体免疫系统功能的提升。