张应

近年来药理学研究表明垫状卷柏具有多种药理学活性，其中抗肿瘤活性具有特异性得到关注和重视[1-3]。本课题组前期对垫状卷柏提取物(Selaginelpulvinate extracts，SP) 的抗肿瘤活性进行系统性的筛选，发现SP对人白血病细胞系K562的体外细胞增生抑制作用最强，为进一步研究其作用机制，笔者开展了SP对K562肿瘤细胞作用机制的研究，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 细胞及药材 K562肿瘤细胞由中国科学院基础医学研究院细胞库提供。垫状卷柏购于安徽亳州滕王药业有限公司，批号为1907003，为全草干燥状态。

1.2 试剂 RPMI-1640培养液(Gibco)；胰蛋白酶(Sigma)；膜联蛋白V/碘化吡啶(Annexin V/PI)试剂盒(BD)；灭菌胎牛血清(FBS，杭州四季青公司)；无水乙醇(国药化试)。

1.3 仪器 超声波清洗仪(KQ-500，昆山市超声仪器有限公司)；CO2细胞培养箱(美国Thermofisher公司)；生物安全柜(美国LABCONCO公司)；CKX41型倒置光学显微镜(Olympus公司)；FACsc-alibur型流式细胞仪(Beeton-Diekinson公司)；台式离心机(Anke TDL-40型，上海安亭科学仪器厂)；压力蒸汽灭菌器(LDZX-50KB，安海申安医疗器械厂)。

1.4 SP的制备 称取适量垫状卷柏干燥的全草，粉碎过40目筛备用。称取100 g状卷柏干燥全草粉末，以75%乙醇作为提取溶剂(料液比1∶20)，浸提24 h后，超声提取20 min，提取温度40 ℃，真空抽滤后滤渣重复上操作2次，最后合并滤液，旋蒸浓缩后并减压干燥成干粉。实验临用前用75%乙醇溶解得到高浓度的母液，0.22 μm滤膜过除滤后待用，给药时用PBS溶液稀释至所需的浓度。最高给药浓度组所用的药液中乙醇浓度均小于0.3%，预实验表明含0.3%乙醇的PBS组与PBS空白组相比较，对本研究所涉及肿瘤细胞株的吸光度均差异无统计学意义(P＞0.05)，说明含0.3%乙醇的PBS对本研究中所有肿瘤细胞株的增生无影响。……