王斓，陈浙丽，徐亮，徐小明，王轶虎

（湖州市第三人民医院 老年精神科，浙江 湖州313000）

1 材料与方法

1.1 细胞及实验动物

1.1.1 少突胶质细胞的来源及培养少突胶质细胞从新生的Sprague-Dawley 大鼠大脑皮层组织中制备[9]，其原代培养是基于McCarthy 技术[10]。实验前，将OPCs 接种于增殖培养基中培养48 h。增殖培养基为DMEM/F12，并添加2%B27、0.5%胎牛血清、L-谷氨酰胺、抗生素、血小板源性生长因子（plateletderived growth factor, PDGF）10 ng/ml 和碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）10 ng/ml。

1.1.2 实验动物雄性CD-1 小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司[动物生产许可证号：SCXK（京）2019-0013]，12 h 昼/夜循环照明。12 只小鼠随机分为对照组和喹硫平组，每组6 只。分别给予生理盐水和富马酸喹硫平10 mg/（kg·d）盐水溶解后腹腔注射30 d。最后一次注射12 h 后处死小鼠，解剖前额皮质进行基因表达分析。

1.2 主要仪器、试剂及药物

1.2.1 主要仪器流式细胞仪（美国Becton Dickinson 公司），ViiA 7 实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）系统（美国应用生物系统公司）。

1.2.2 主要试剂与药物B27（美国Thermo Fisher Scientific 公司），PDGF 和bFGF（美国Protech 公司），大鼠单克隆anti-溴脱氧尿苷（Bromodeoxyuridine,BrdU）和p21（英国Abcam 公司），兔多克隆anti-Ki67和p21 shRNA 质粒（美国Santa Cruz 公司），1% N2 和β-actin（英国Sigma 公司），Trizol 试剂（美国Invitrogen公司），Trizol 试剂盒（美国Invitrogen 公司）。富马酸喹硫平（英国AstraZeneca UK Limited 公司，批准文号：H20160665，规格：0.2g×20 片）

1.3 细胞周期检测

将OPCs 细胞按5×105个细胞/孔接种于聚-赖氨酸包覆的6 孔板中。在增殖培养基中培养48 h，用碱性培养基（含2%B27 的DMEM/F12 培养基）替代培养，并用喹硫平（1 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L）处理48 h。为检测喹硫平对PDGF 诱导的细胞周期激活的影响，增殖培养基培养48 h 后，用基础培养基替代培养基，并加入PDGF（10 ng/ml）、喹硫平（10 μmol/L）或两者的混合物培养48 h。将OPCs 细胞分为对照组（培养48 h）、PDGF 组（加入PDGF 10 ng/ml 培养48 h）、喹硫平组（加入喹硫平10 μmol/L培养48 h）和PDGF+喹硫平组（加入PDGF 10 ng/ml和喹硫平10 μmol/L，培养48 h）。……