差速离心法提取血小板来源的外泌体及其鉴定
2021-08-02陈文科操龙斌陈雨薇冯杰娥
中外医疗 2021年16期
陈文科,操龙斌,陈雨薇,冯杰娥
南方医科大学南海医院医学检验科,广东佛山 528244
多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中,主要分布于细胞上清液,例如血浆、血清等。外泌体内含有丰富的蛋白质、mRNA等,因此能够广泛参与细胞间的物质交换。人体正常状态下,血液中血小板来源的微粒占据所有微粒的70%以上。近年来,成分输血逐渐引起了医学界的重视和关注,成为了治疗肿瘤患者的重要措施,外泌体不仅在细胞间信息传递发挥着重要作用,而且在肿瘤治疗、药效研究等众多领域具有关键作用[2]。对于血小板来源外泌体的提取与鉴定的研究具有重要价值,对于日后血小板的研究具有借鉴指导意义[3]。该次于2020年6—9月期间,方便选取实验样本100份展开研究,现报道如下。
1 材料与方法
1.1 检测仪器
该次实验所需的检测仪器以及试剂:超速离心机:WX100;离心水平转头:SW32TI;透射电镜:LVEM25;全能型化学发光成像系统;血小板震葛仪:PL-11;BCA蛋白质定量试剂盒;HSP70抗体ALXI抗体。
1.2 样本来源
方便选取该市血站2019年内献血志愿者捐赠的单采血小板,献血者均符合中华人民共和国卫生部所规定的献血者健康标准,检验合格后在血小板震荡仪上进行保存留用[4]。
1.3 样本处理
选择当天采集的同一单采血小板样本,分A、B、C、D、E共5组,3袋/组, 其中A、B组分别标为A1、A2、A3、B1、B2、B3号。A组在血小板振荡器上存放1 d后进行提取,B组在血小板振荡器上震荡存放3 d后进行提取;……
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