乔 曼，李冬生，何 媛,张 岑，李晓秋，李少颖

姜黄素是姜黄根茎植物中最重要的亮黄色多酚成分之一，临床广泛用于咳嗽、鼻窦炎、哮喘、风湿病、糖尿病及心血管疾病等的治疗[1-2]。近年来发现，姜黄素具有抗肿瘤作用，其机制尚未完全阐明，主要与抑制增殖、诱导凋亡、DNA甲基化及抑制血管生成等有关[3-5]。癌细胞转移是癌症高病死率和复发率的重要原因，与表皮间质转化(EMT)等多种原因有关，如何抑制癌细胞转移是癌症研究的热点问题。研究表明，姜黄素有抑制肺癌细胞侵袭的作用，其机制可能与抑制TGF-β介导的EMT有关[6]，但具体机制尚未完全阐明。SRPK1是一种丝氨酸/精氨酸蛋白激酶，能够磷酸化蛋白质的丝氨酸/精氨酸残基，与肺癌转移有关[7]。姜黄素抑制肺癌细胞转移是否与SRPK1相关尚未明确，故本研究对此展开研究。

1 材料与方法

1.1细胞培养和试剂 肺癌A549细胞购自上海酶研生物科技有限公司；姜黄素购自美国Sigma公司，批号:C1386-10G；RPMI 1640培养基和胰蛋白酶购自Gibco公司；DMEM高糖培养基购自Hyclone公司；标准胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司;Taq DNA聚合酶购自美国MBI公司;逆转录试剂盒购自美国Invitrogen公司，批号：998897;质粒提取试剂盒购自Vigrous公司。SRPK1抗体(ab90527)、TGF-β1抗体(ab92486)、ZEB1抗体(ab203829)、TWIST1抗体(ab50887)和SNAIL抗体(ab229701)均购自美国Abcam公司。

肺癌A549细胞培养于含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素、100 μg/ml链霉素的RPMI 1640培养基中，在37℃、5% CO2培养箱中孵育,待细胞长满培养瓶80%时用胰蛋白酶消化、计数、传代。

1.2SRPK1减低肺癌A549细胞系的构建 通过检索NCBI Gene Bank数据库，获取SRPK1 RNA的完全序列，选择编码区作为设计siRNA的靶序列。……