马果果，马志强，李忍萍

（河南科技大学第二附属医院消化内科，河南 洛阳 471000）

我国是胃癌（gastric carcinoma）高发国家，每年新发病例占全球的40%[1]。近年来，随着对恶性肿瘤研究的不断深入，越来越多的学者认为，肿瘤干细胞也具有固体肿瘤特征，胃癌可能是一种干细胞疾病[2]。因此研究胃癌干细胞内的自我更新相关分子信号通路，对于胃癌的针对性治疗具有重要意义。胃癌的高侵袭性、高转移性及高复发性是本病高致死率的主要因素。基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2，MMP-2)是基质金属蛋白酶之一，能降解细胞外基质。MMP-2是肿瘤侵袭、转移以及肿瘤供血血管新生过程中的重要参与因子[3]。研究显示[4],MMP2可能是肿瘤干细胞生物学活性的重要促进因子。但是MMP2对胃癌干细胞的影响，以及在胃癌发生发展中的作用机制少有报道，因此本研究探讨MMP2在胃癌干细胞中表达水平的意义，报告如下。

1 材料与方法

1.1 胃癌细胞系 选取胃癌MNK28细胞系，购自第四军医大学西京医院全军消化研究所。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养 胃癌细胞系MKN28解冻后，置于含有10%胎牛血清的RPMI-1640培养基内进行培养,培养环境如下：37℃饱和湿度，CO 2体积分数为5%,每两天传代一次。2.5g/L胰蛋白酶进行消化、传代。

1.2.2 无血清悬浮培养 取胃癌细胞系MKN28对数生长期的细胞制成单细胞悬液，PBS洗两次之后，置于含EGF(15ng/ml)、bFGF(8ng/ml)、B27(1∶50)的DMEM/F12无血清培养基内，随后以500个/孔接种于低黏附24孔板中,在37℃、50ml/L CO2孵箱中培养，每4d换液1次。

1.2.3 质粒转染 取胃癌细胞系MKN28对数期生长的细胞，铺到6孔板，每孔35万个细胞，使用LipofectaminTM 2000转染，操作步骤参照相应说明书。……