杨 华，徐金柱，赵丹阳，邱华龙，田龙燕，秦长生

(1 华南农业大学 农学院，广东 广州 510642；2 广东省林业科学研究院/广东省森林培育与保护利用重点实验室，广东 广州 510520)

代谢组学利用现代分析技术对生物体内小分子化合物进行定性定量研究[1]，结合现代生物信息学可实现对代谢物全面地、无偏倚地分析[2]。研究微生物代谢物的变化动态，有助于我们更加了解微生物内部的生理变化。目前代谢组分析技术主要有气相色谱−质谱联用(GC-MS)[3]、液相色谱−质谱联用(LC-MS)[4]和核磁共振(NMR)[5]等。基于GCMS技术的样品前处理步骤主要包括：淬灭、提取、衍生化和检测。在代谢物淬灭过程中，应尽可能地保证微生物细胞的完整性，避免胞内代谢物外流[6]，可以通过迅速降低温度或者在菌体培养液中加入有机溶剂等手段抑制代谢酶活性。冷甲醇淬灭是普遍使用的方法[7]，它可以在亚秒时间内阻断代谢反应，将胞内外的代谢物区分开[8-9]。常用的提取方法有冷甲醇液氮反复冻融法[10]和75%乙醇煮沸法[11]等。常用的提取液有热乙醇、高氯酸或碱、甲醇和三氯甲烷等。在破碎细胞时，提取液将胞内的代谢物溶解，为了确保提取到稳定可靠的代谢物，可以加入4−羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)和哌嗪乙磺酸(PIPES)等盐离子进行缓冲[12]。此外超临界流体萃取、微波辅助萃取[13]、固相萃取、固相微萃取等方法也可用于微生物代谢物提取。但至今，仍然没有一种适用于所有微生物的提取方法[14]，不同微生物、不同提取方法提取的代谢物倾向性和分析技术亦不同。……