金鑫燕

(青海大学畜牧兽医科学院，西宁 810016)

生长激素受体 (growth hormone receptor，GHR)是众多被认为影响泌乳性能候选基因中影响泌乳性状较多的一个基因,牛GHR基因位于20号染色体，由10个exon和9个子intron组成，基因序列SNP突变会使该基因结构和功能发生改变，从而影响信号转导及该基因介导的生长激素(growth hormone，GH)基因的生理效应[1]，最终使泌乳、生产等经济性状发生改变。将牛GHR基因作为候选基因，研究该基因与泌乳、生产性能的关系，对牛的育种具有重大实践意义[2]。国内外大量研究发现，GHR基因第8exon T/A替换，使其编码的氨基酸呈现F279Y转换，显著影响牛的泌乳性能[3-7]。也有研究表明，GHR基因部分外显子多态产生的不同基因型对乳脂率[8、9]、乳蛋白百分含量[10]有影响。本研究对青海泽库高原型牦牛GHR基因部分片段进行了SNP多态性检测，结合乳成分数据分析了该SNP多态对乳成分的影响，旨在为下一步针对牦牛乳选育提高提供一定的分子遗传学基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验动物来自青海省泽库县某牧场，采集32头(胎次为2～3胎，年龄为6～7岁，产犊时间为当年4月底到5月初)泌乳牦母牛颈静脉血样5mL，干冰运往实验室，-20℃冷冻保存。

1.2 基因组DNA提取

基因组DNA提取采用柱式血液基因组DNA抽提试剂盒(生工)。提取后DNA采用分光光度计检测浓度和纯度。

1.3 引物序列及PCR反应程序

PCR引物设计参照NCBI 中登录号为AM161140.1序列。

表1 牦牛GHR基因片段 1、2、exon 8 扩增引物序列

PCR反应体系：DNA模板2μL，引物F、R 各2μL，dNTP 2μL，10×Taq buffer 5μL，Taq酶 0.5μL，加ddH2O至50μL。

PCR反应条件：95℃预变性4min；94℃变性30 sec，55℃退火30sec，72℃延伸50 sec；35 cycle，72℃修复延伸6 min。

1.4 PCR产物回收测序

PCR产物切胶后经PCR产物回收试剂盒回收后冷冻，冷冻样品干冰送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序及检测SNP。……