杨成兰，武雄雄，祁存英，李欣音，张倩倩，段瑞君*

(1.青海大学生态环境工程学院，青海 西宁 810016；2.青海大学农牧学院，青海 西宁 810016)

青稞(HordeumvulgareL.var.nudum.)占青藏高原作物种植面积的43%，在青藏高原农作物中具有重要地位[1]。随着社会经济的不断发展，青稞成为了藏区草料、酿酒等农产品加工业的重要材料[2]。

植物原生质体被认为是研究基础生命科学及作物育种改良的理想试验材料[3]。植物原生质体瞬时转化体系被广泛应用于细胞瞬时转化、亚细胞定位等试验[4]。原生质体的分离和纯化对原生质体瞬时转化体系起决定性的作用，近年来，有关玉米[5]、苜蓿[6]、小麦[7]等原生质体分离和转染的研究已较为成熟，但对于青稞原生质体分离和转染的研究较少。

酶解法是植物原生质体分离时常用的方法之一。酶解法影响原生质体产量和活力的因素很多，其中甘露醇浓度、酶解时间和离心速度是比较重要的因素。因此，本研究选用青稞幼叶作为研究对象，通过对其原生质体制备过程中各影响因素的调整，分析甘露醇浓度、酶解时间、离心速度和不同苗龄对青稞原生质体产量和活力的影响，旨在确定青稞原生质体制备的最优体系，为利用青稞原生质体做进一步研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

(1)材料。本试验选用由青海大学农林科学院提供的青稞“肚里黄”品种。

(2)试剂。纤维素酶(Cellulase-R10)、果胶酶(Macerozyme-R10)、牛血清蛋白(BSA)、甘露醇、二乙酸荧光素(FDA)、2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)、氯化钙(CaCl2)、氯化钠(NaCl)、氯化钾(KCl)。

1.2 试验方法

1.2.1 正交试验设计 本试验选择3%纤维素酶和1%果胶酶作为酶液组合。……