伍思蓉，蔡 霈，袁 庆，曹建国，杨小平，2，张坚松*

(1.湖南师范大学医学院，中国 长沙 410006；2.湖南省小分子靶向药物研究与创制重点实验室，中国 长沙 410006；3.湖南省妇幼保健院药剂科，中国 长沙 410013)

肺癌是全世界最常见的癌症死亡原因之一，每年估计有160万人死亡[1]。肺癌可以分为小细胞癌(SCLC)和非小细胞癌(NSCLC)，其中，约85%的肺癌患者具有NSCLC组织学亚型[2]。早在2008年，Eramo团队发现非小细胞肺癌中存在罕见未分化细胞群，该细胞群高表达CD133，并具有高致瘤性[3]。笔者的前期研究支持上述结果，通过干细胞条件培养悬浮培养可富集具有干细胞特性的球形成细胞，即肿瘤干细胞样细胞，具有CSCs特性[4]。MicroRNA(miRNA)是长度为18至25个核苷酸的内源性非编码RNA，涉及广泛的基本细胞生物学过程，例如细胞分化、增殖、生长、迁移、凋亡以及肿瘤发生[5]。多项研究证明NSCLC中存在大量肿瘤相关miRNAs。通过对GEO数据库中多个数据集(GSE29248，GSE56036和GSE102287)进行高通量数据的分析发现，miR-127-5p在NSCLC组织中高表达，可能具有肿瘤促进作用。有研究表明，miR-127-5p在多种疾病中具有重要作用，包括肝细胞癌[6]、宫颈癌[7]以及乳腺癌[8]等。因其在NSCLC中的作用及功能还未见研究报道，本研究拟探索miR-127-5p非小细胞肺癌细胞干细胞特性的影响及机制。

1 材料与方法

1.1 细胞培养

人非小细胞肺癌细胞系 H358和A549购自中国科学院细胞库(中国上海)，用含10%胎牛血清(FBS)，1×105IU·L-1青霉素和100 mg·L-1链霉素的RPMI-1640培养基置于37 ℃下含5%CO2的增湿培养箱中培养。

1.2 细胞转染

RNA oligo(包括miR-127-5p mimic, mimic control, miR-127-5p inhibitor以及inhibitor control)购于吉玛基因(中国苏州)。取生长状态良好的H358和A549细胞，待细胞融合度达到70%后根据操作规范进行转染。……