鲁振环，张涛，朱晓峰，曾德强

（广东省韶关市粤北人民医院 胃肠外科，广东 韶关 512025）

0 引言

结直肠癌是临床常见恶性肿瘤，流行病学调查显示其发病率和死亡率居恶性肿瘤第四位，且其发病有年轻化趋势[1]。结直肠癌的早期诊断是改善患者预后的关键，游离DNA是由单链和双链DNA组成的无细胞形态的DNA，既往有报道显示肿瘤微转移灶和细胞裂解可增加游离DNA表达量[2-3]，推测游离DNA可能参与结直肠癌变过程，本研究回顾性分析医院60例接受血清循环游离DNA（circulating free DNA，cfDNA）检测患者的临床资料，探讨cfDNA与结直肠癌病理特点的关系，为结直肠癌的早期诊断提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料。本研究经我院伦理委员会批准，采用简单随机抽样法选取医院2018年9月至2019年9月60例接受cfDNA检测的患者作为研究对象，对其临床资料进行回顾性分析。其中30例经病理活检确诊为结直肠癌[4]，为观察组，其中男18例，女12例；年龄（49.62±9.05）岁；体重指数（20.79±2.31）kg/m2。另30例为结肠息肉患者，为对照组，其中男21例，女9例；年龄（47.91±8.65）岁；体重指数（20.55±2.08）kg/m2。两组患者性别、年龄、体重指数等基本资料无显著性差异（P＞0.05），具有可比性。

1.2 实验试剂和方法。在患者入院后24 h内空腹采集肘静脉血5 mL，3000 r/min离心10 min，留取血清于EP管内，-700C冻存备用。选用Qiagen公司生产的DNA提取试剂盒，游离DNA提取方法参照试剂盒说明进行。利用 Invitrogen 公司生产的 Sybr Green 定量 PCR 预混液进行。利用分子生物学软件DNAStar对GenBank中登录的PPIA基因序列进行分析，再用PrimerSelect软件在基因保守区域设计检测引物，并对引物进行二聚体和发夹结构等分析，筛选出2对引物，序列分别为PPIA-116F：AAG AAG TGA CTG CTC ATC TA，PPIA-116R：AAG CAC TGC TGCACG ATC A；……