储文梅 熊旭东 何淼 计高荣 陈莉云 童佳 张卓成 李黎

胃癌是发病率与死亡率均较高的消化道恶性肿瘤，据2020年全球癌症统计报告，胃癌在2020年的全球癌症新发病例中排名第五，致死率全球排名第四［1］。手术切除是胃癌的主要治疗方式，并以5⁃氟尿嘧啶（5⁃fluorouracil，5⁃FU）为主的化疗方案为辅［2］。然而部分患者不可避免地出现耐药，致使药物疗效降低甚至无效，且化疗药物耐药胃癌患者目前尚没有有效的治疗方法。白藜芦醇（resveratrol，RES）是一种来源于虎杖、葡萄与花生等植物的多酚化合物，具有抗炎、抗氧化、抗衰老、抗血栓与抗肿瘤作用，且生物安全性高，毒副作用小，价格低廉，来源广泛［3⁃4］。近年有研究表明，RES可以降低肿瘤多药耐药性，提高化疗敏感性［4⁃5］。本研究通过检测RES及其联合 5⁃FU对胃癌耐药细胞SGC⁃7901/5⁃FU的生物学效应，并初步探讨其作用机制。

1 材料与方法

1.1 主要材料与仪器

人胃癌细胞5⁃FU耐药株（SGC⁃7901/5⁃FU细胞株）购自北纳生物；5⁃FU购自齐鲁制药有限公司；RES（纯度＞98%）购自杭州华安生物技术有限公司；TRIzolTMReagent购自Invitrogen公司；POWER SYBR GREEN PCR MASTER购自Applied Biosystems公司；ReverTra Ace qPCR RT Kit购自TOYOBO公司；GAPDH抗体购自Proteintec公司；多药耐药基因1（multi⁃drug resistance gene 1，MDR1），P⁃糖蛋白（P⁃glycoprotein，P⁃gp）、Bcl2和Caspase 3抗体购自Abcam公司；Annexin V⁃FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒（C1062S）、TUNEL细胞凋亡检测试剂盒（C1091、Cell Counting Kit⁃8、C0037）均购自Beyotime公司；实时定量PCR仪购自ABI公司；FACS Calibur购自BD Bioscience公司；倒置荧光显微镜OLYMPAS IX71购自OLYMPAS公司。

1.2 细胞培养与分组

从液氮罐取出装有SGC⁃7901/5⁃FU细胞的冻存管，放入37℃水浴锅中复苏，800 r/min离心5 min，弃上清液，加入含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基重悬细胞团，转移至10 cm2培养皿中，于37℃、5% CO2培养箱中培养。每72 h更换1次培养基，待细胞融合度达70%～80%后，胰蛋白酶消化，并按1∶3的比例进行传代培养。……