郭宇航，辛 华，黄昕明，王 勇

(1.佳木斯大学附属第一医院,黑龙江 佳木斯 154003；2.佳木斯市妇幼保健院，黑龙江 佳木斯154004)

近年来，肺炎克雷伯菌为临床主要检出的革兰阴性杆菌，可引起多种细菌感染。碳青霉烯类药物作为临床治疗革兰阴性致病菌感染的最后一道防线，广泛应用于临床治疗。特别是多重耐药肺炎克雷伯菌的出现，给临床治疗带来了一定的阻碍。尤其在重症监护病房的患者中检出率更高，同时由于该病房的患者年龄大、基础疾病多、机体免疫力低下等原因，使得CRKP的患者发病率和死亡率都很高。然而，越来越多的碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)被检出，且呈上升趋势。本研究旨在分析CRKP耐药菌株的耐药情况和分子流行病学特点，为我院的感控工作提供一定的数据支持，同时也可以很大程度上减少耐药菌的院内传播。

1 材料与方法

1.1 菌种鉴定与药敏

对佳木斯大学附属第一医院2016～2018年非重复CRKP进行收集，通过VITEK 2 Compact进行药敏鉴定，耐药菌株K-B法复核。

1.2 仪器与试剂

药敏纸片购自英国Oxoid公司，PCR扩增仪为美国Bio-Rad公司，凝胶成像系统为上海领城生物科技公司。

1.3 表型鉴定

碳青霉烯灭活试验鉴定菌种表型。依据CLSI标准，挑取1μL满环待检菌株于肉汤，混匀加入美罗培南纸片，确认纸片完全浸没肉汤，温箱孵育4h。挑取ATCC25922单个菌落配制0.5麦氏浊度，涂布MH平板，将孵育后纸片取出贴入MH平板，过夜培养。

1.4 PCR扩增

煮沸法提取菌株DNA，PCR扩增KPC、NDM及OXA-48耐药基因，引物如下(上海生工合成)(表1)。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳及成像系统观察后测序比对(哈尔滨博仕生物公司)。……