王晓磊 高彦彬 张涛静

足细胞损伤是糖尿病肾病(diabetic kidney disease, DKD)肾纤维化发生发展的重要因素之一。转分化作为足细胞损伤的一种重要形式，在与足细胞损伤相关的疾病进程中发挥着重要作用。在慢性高血糖等持续刺激下，足细胞将失去自身成熟细胞的细胞表型标志物(如nephrin)，而间充质细胞样表型标志物，如α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)的表达增多[1-2]。获得间充质细胞表型后的足细胞迁移能力增强，并能够产生不必要的胶原等纤维蛋白，进而促进肾纤维化的进展[3]。既往研究发现miRNA-155是肾纤维化的主要致病因子之一，在肾纤维化的进程中发挥着关键作用[4]。笔者研究团队前期研究发现，中药芪卫颗粒能改善DKD足细胞损伤，起到延缓肾纤维化进展的作用，但其相关机制尚不清楚[5]。因此，本研究将在以往研究的基础上，以miRNA-155为切入点，采用体外实验观察芪卫颗粒对高糖诱导的足细胞转分化及miRNA-155的影响，部分阐明芪卫颗粒改善足细胞损伤的作用机制。

1 材料与方法

1.1 细胞来源

小鼠肾足细胞株(MCP5)购自北纳生物(货号：BNCC337685)。

1.2 实验药物与主要试剂

芪卫颗粒(药物组成：黄芪、鬼箭羽、生地黄、大黄、莪术，质量比例为3∶3∶3∶2∶2)由北京中医药大学东方医院制剂室制备。

DMEM低糖培养基和胎牛血清购自美国Gibio公司，兔源多克隆nephrin抗体购自美国Novus Biologicals公司(货号：NBP1-77303)，兔源多克隆α-SMA抗体购自美国Abcam公司(货号：ab5694)，miRNA-155 inhibitor试剂盒套装购自广州锐博生物(货号：miR20000165-1-5)，CCK-8法细胞增殖检测试剂盒购自南京凯基生物(货号：KGA317)。

1.3 含药血清的制备

选取雄性SPF级SD大鼠20只(体重为180±20 g)，随机分为芪卫颗粒组和空白对照组(分别用于制备含药血清及空白血清)2个组，每组10只。……