黄晓燕 丘早瑜 陈丽丹 李林海

世界卫生组织(WHO)颁布的《院内感染防治实用手册》数据显示60% 的细菌感染与使用医疗器械有关［1］,包括手术器材及植入材料。银、铜具有抗菌作用早有报道,在医用耗材中加入具有强烈抗菌功能的银、铜金属纳米单质或离子均可达抗菌目的［2,3］,但其具体作用及机制尚在探索阶段,无统一标准。本实验通过研究Ag+、Cu2+对临床常见致病细菌［大肠埃希菌(escherichia coli,CRE)、肺炎克雷伯菌(carbapenemresistant klebsiella pneumoniae,CRKP)、铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa,PAE)、金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus,MASA)及粪肠球菌(enterococcus faecails,EFA)］的抗菌性能,为临床使用和研发新型抗菌材料提供参考依据。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1Ag+、Cu2+溶液的配制 利用灭菌去离子水配制浓度均为 0.1 M 的硝酸银(AgNO3)和氯化铜(CuCl2·2H2O)水溶液,用0.22 m 的滤菌器过滤后装在无菌容器备用,其中硝酸银的配制及保存需要避光操作。

1.1.2菌株

1.1.2.1临床菌株 随机选取本院检验科微生物室分离的来源于伤口分泌物及组织的多重耐药菌株饰物CRE、CRKP、PAE、MARA、EFA,所有菌株均采用法国梅里埃VITEK MS 全自动快速微生物质谱检测仪进行鉴定,菌株保存于-80℃冰箱。

1.1.2.2标准 菌株 CRE(ATCC25922)、CRKP(ATCC700603)、PAE(ATCC27853)、MARA(ATCC25923)、EFA(ATCC29212)干粉均购自广东临床检验中心,溶解后转种血平板备用。

1.1.2.3菌株贮存 将上述临床菌株及标准菌株接种至血平板,35℃ CO2温箱培养24 h 备用。

1.1.3阳离子调节肉汤(CAMHB) 的配制 称取CAMHB 肉汤干粉22.0 g,加热溶解于1000 ml 去离子水中,121℃高压灭菌20 min 备用。

1.1.4无菌去离子水 取去离子水121℃高压灭菌20 min 后备用。

1.2方法

1.2.1菌悬液的制备［4］取上述所有菌株的24 h 新鲜培养物接种至CAMHB 肉汤,35℃ CO2温箱恒温增菌6 h 后,用比浊仪配制成0.5 麦氏单位的菌悬液(相当于108cfu/ml),再用无菌去离子水梯度稀释为100 倍,使之成为106cfu/ml 的菌悬液,备用。……