黄艺滢,张文龙,石桂英,雷雪裴,高苒,白琳

(国家卫生健康委员会人类疾病比较医学重点实验室,中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,北京市人类重大疾病实验动物模型工程技术研究中心,北京 100021)

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic Tlymphocyte associated protein 4,CTLA4)和CD28是表达在CD4+和CD8+T细胞的同源受体,两者共享在抗原呈递细胞表面表达的一对配体,并且在T细胞活化中介导相反的功能。配体与CD28相互作用,介导T细胞与T细胞受体信号共刺激。而配体与CTLA4的相互作用可以介导T细胞功能的抑制[1]。目前,癌症免疫疗法已成为治疗癌症的有效方法,CTLA4是经过验证的免疫检查点的靶标之一[2]。由于CTLA4功能的重要性,在许多临床前和临床研究中都对anti-CTLA4抗体[3]及CTLA4阻滞剂[4-10]进行了癌症治疗的测试。人类和小鼠的CTLA4只具有75.16%的同源性,目前批准用于临床的anti-CTLA4抗体可以与人源CTLA4结合,但不会与鼠源CTLA4交叉反应[11]。因此,在利用小鼠进行药物有效性和安全性评价时,使用CTLA4人源化的小鼠是更好的选择。

采用CRISPR/Cas9的方法将人源CTLA4基因导入到小鼠的受精卵中,同时敲除小鼠内源CTLA4基因的表达。CTLA4敲除小鼠在出生后3～5周内死亡,而CTLA4人源化小鼠表型正常。通过建立基因结构和调节方式与人类相似的模型,改善由于CTLA4在人与小鼠中的种属差异导致的在临床测试与动物实验结果的差异,从而使药物评价的结果更加客观。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物

SPF级C57BL/6J(雌性,3～4周龄,7～12 g,15只;雄性,8周龄,19～25 g,30只)及ICR小鼠(雌性,8～10周龄,25～33 g,4只),购买于北京华阜康生物科技股份有限公司【SCXK(京)2020-0004】并在本所SPF级动物屏障环境动物房【SYXK(京)2019-0014】中长期饲养繁殖。……