孙昂然刘嘉豪陈星君李梦春文成刚高敏胡章雪*

(1.陆军军医大学大坪医院,重庆 400042;2.96961部队卫生队,北京 102206;3.陆军军医大学基础医学院生物化学与分子生物教研室,重庆 400038)

胎儿将胎粪污染的羊水误吸入肺所引起的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是新生儿重症研究的一个重要问题[1],然而胎粪中的重要成分胆酸,是否在ALI中发挥关键作用,尚无直接证据。胆酸作为一种重要的致炎因子[2],主要用于重症胰腺炎动物模型的构建[3],但能否诱导动物的肺损伤,尚无报道。本实验旨在利用胆酸构建小鼠的肺损伤模型,为探究胆酸诱发新生儿肺损伤的分子机制提供基础和依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物

54只6～8周C57BL/6清洁级野生型小鼠。雄鼠18只,体重(26.0±1.8)g;雌鼠36只,体重(19.3±2.4)g,购于斯贝福(北京)生物技术有限公司【SCXK(京)2019-0010】。饲喂设施由陆军特色医学中心提供【SYXK(军)2017-0057】,饲养条件:(22±2)℃,昼夜各半循环照明,自由采食饮水,饲养7 d后开始实验。所有操作均符合陆军军医大学实验动物福利伦理审查委员会伦理学要求(审批号:AMUWEC 20201510)。

1.1.2 主要试剂与仪器

胆酸(Sigama,CAS:81-25-4);DMSO溶液(Solarbio,CAS:D8371);PBS溶液(Hyclone,CAS:SH30256.01);4%多聚甲醛固定液(碧云天,CAS:P0099);HE染色剂(碧云天,CAS:C0105);鼠TNFαELISA试剂盒(碧云天,CAS:PT512);鼠IL-1β ELISA试剂盒(碧云天,CAS:PI301);血气分析测试卡片(Abbott Point of Care Inc,CAS:03P88-25)。

小动物X光机(faxitron X-ray,MX-20,美国);手术器械(碧云天);电子天平(北京赛多利斯)。

1.2 方法

1.2.1 药品制备

胆酸以DMSO溶解,再用PBS稀释,使其终浓度为5 mmol/L。

1.2.2 动物分组

按照给药方法×药物(3×3)析因设计分组小鼠。给药方法分为:气管切开、鼻滴1 d,鼻滴6 d。药物为胆酸,并且设置其对应的溶剂对照DMSO组和空白对照PBS组,共9组,每组6只(雌鼠4只,雄鼠2只)。……