潘莎莎 郭睿 杨健 宋博 黄涛 李幸 朱栋 徐燕妮 戎春燕 汪庆燕 周翔

（常州千红生化制药股份有限公司 江苏常州 213125）

1 前言

胃酶由胃部的胃粘膜主细胞分泌的胃蛋白酶原在pH 1.5～5.0条件下活化而成，可将食物中的蛋白质分解为小的肽片段。从猪、羊或牛的胃黏膜中提取的胃酶，均为白色或淡黄色的粉末，国内生化药厂常将其单独制成胃酶片或复方制剂，用于治疗消化不良、食欲不振等疾病。国家对于生化药品的原材料来源进行了相关规定，要求选择生化药品的原材料时需要根据实验目的确定原材料的种属和器官组织类别，同时选取的原材料必须具有一定的代表性[1]。根据相关要求，本文选择猪、牛、羊（包括绵羊和山羊）作为研究物种，通过设计针对这些物种基因的胃酶检测方法来确定胃酶种属来源。

本次研究主要依赖种属鉴别实验，围绕专属性和耐用性方面的问题，建立基于荧光定量PCR的方法来对胃酶种属来源开展质控研究，理论依据主要来自《药品质量标准分析方法验证指导原则》（中国药典2015年版四部通则9101）等相关标准规范和医学要典[2]。

2 方法原理

本次实验的主要目的在于探究胃酶种属来源问题。本文根据种属不同则基因序列不同这一基本原理，通过引物和探针并结合聚合酶链式反应来提取待研究物种基因组特有的基因序列并进行适度扩增，通过研究扩增曲线及未知样品的Ct值与起始模板拷贝数的数量对应关系来确定未知样品初始模板基因数量。……