朱文亮黄晓佩邱 实冯凌霄邵换璋

(河南省人民医院重症医学部,郑州 450000)

1 材料和方法

1.1 实验动物

C57BL/6 小鼠 50 只,SPF 级,雌雄各半,6~8 周龄,体重18~22 g,由河南省实验动物中心提供[SCXK(豫)2017-0001],实验于河南省实验动物中心实验室独立动物房[SYXK(豫)2016-0002]进行。研 究 方 案 获 本 院 伦 理 委 员 会 批 准(HNSRMYY2019002),实验严格遵循实验动物使用的3R 原则给予人道关怀。

1.2 主要试剂与仪器

地塞米松磷酸钠注射液(天津天药药业股份有限公司,批号:170123);红景天苷(纯度≥98%,南京泽朗生物科技有限公司,批号20181108);Notch1、HERP、Hes1 兔源单克隆抗体、羊抗兔二抗(美国CST 公司,批号:3608、26730、11988、7074);实验所需耗材均购自北京索莱宝科技有限公司。 倒置显微镜(日本 OLYMPUS 公司);血气分析仪(美国Instrumentation Laboratory Company);氧气浓度分析仪(北京世联博研科技有限公司);二氧化碳监测仪(北京中创汇安科贸有限公司);PCR 仪(美国Applied Biosystems 公司); 凝胶成像仪(美国Syngene 公司)。

1.3 实验方法

1.3.1 分组与造模

将50 只C57BL/6 小鼠随机分为5 组,每组10只。 模型组、阳性对照组、红景天苷高、低剂量组小鼠均建立高氧肺损伤模型。 造模方法:将小鼠置于自制密闭氧气舱内,氧舱连接输氧管、氧气浓度分析仪和二氧化碳监测仪,箱内放置钠石灰用以吸收小鼠呼出的CO2,保持箱内CO2浓度低于0.5%,调节氧气流量,使氧舱内氧浓度高于95%,模型组、阳性对照组、红景天苷高剂量组和低剂量组小鼠均持续暴露于氧气舱内3 d,正常对照组小鼠暴露于室内空气中[8]。

1.3.2 给药方法

造模第2 天开始给药。 根据文献[9]及预实验结果确定各组小鼠给药剂量,红景天苷高剂量组和低剂量组小鼠分别采用50 mg/kg、25 mg/kg 的红景天苷溶液(临用前用蒸馏水配置)灌胃,阳性对照组采用10 mg/kg 地塞米松注射液灌胃。……