丝胶蛋白精制纯化后用作牛血浆纤连蛋白冻干保护剂的试验
2021-07-15王志强张慧华
北方蚕业 2021年2期
王志强 张慧华
(1.南阳市经济作物技术推广站,河南南阳 473000;2.河南民兴生物科技股份有限公司,河南社旗 473300)
纤连蛋白(fibronectin,FN)是一种多功能的细胞外基质糖蛋白,由两个几乎相同的分子量为220 kD的二硫键结合多肽组成[1]。细胞纤连蛋白在结构上和抗原性上类似于来自血浆的冷不溶性球蛋白,因此形成的多克隆抗体通常交叉反应[2]。FN分子含有几个功能和结构上不同的结构域,它们可以结合细胞表面受体,结合胶原蛋白、纤维蛋白原或纤维蛋白以及糖胺聚糖、蛋白多糖和肝素等[3]。因FN在液体状态下极易降解,致使其生物活性下降,所以将FN制备成冻干制剂是目前最常见的保存形式[4]。目前FN制剂中的保护剂为1%~2%的血清白蛋白和2%~3%的明胶等高分子聚合物。然而,由于血清白蛋白潜在的血源性病原体污染限制了其在蛋白产品中的应用,另外明胶受限于其浓度,浓度过大时会增加最终制剂的水分[5]。
丝胶是被覆于丝素外层的一种球状蛋白,约占蚕丝的20%~30%,其分子量在1.0~200 kD不等,含丝氨酸、天门冬氨酸、丙氨酸、谷氨酸、甘氨酸、苏氨酸、赖氨酸、精氨酸等18种氨基酸,其中包括人体所必需的八种氨基酸;丝胶蛋白中丝氨酸和天门冬氨酸等极性侧基氨基酸极高,是一种亲水基团极丰富的蛋白质,具有良好的水溶性和抗氧化性强[6]等特性。丝胶蛋白现已作为细胞培养的基质和促进细胞有丝分裂和增殖的添加物[7], Kazuhisa等[8]发现丝胶蛋白对细胞和蛋白质有冻结保护作用,其抗冻保护作用与常见的抗冻保护剂牛血清白蛋白(BSA) 相当[9-11]。……
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