侯晶晶，殷梓辛，房传赐，李雅娟，陈溪雯，孙卉，覃薇，钱亚云

扬州大学医学院，江苏 扬州 225009

南蛇藤属于卫矛科南蛇藤属植物，具有解毒消肿、活血行气等功效。已有研究表明，南蛇藤提取物（celastrus orbiculatus ethylacetate extract，COE）具有抑制肿瘤生长的作用［1-2］。课题组发现，COE可抑制胃癌细胞的上皮间质转化（epithelial stromal transformation，EMT）［3］。胃癌的发生及早期转移与EMT的程度呈正相关［4-5］，癌细胞通过EMT可获得更具侵袭性的特点。为进一步研究COE对MGC803/miR-144+细胞的作用机制，本研究观察COE对MGC803/miR-144+细胞增殖与迁移能力的影响，进一步研究其与EMT之间的作用关系。

1 材料

1.1 细胞人胃癌MGC803细胞（中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，货号C6582）；MGC803/miR-144+细胞株由本实验室构建。

1.2 药物与试剂南蛇藤（广州致信药业有限公司，批号：070510）；5-氟尿嘧啶注射液（5-fluorouracil，5-Fu，天津金耀氨基酸有限公司，批号：1302201）。RPMI 1640细胞培养基（美国Hyclone公司，货号：SH308009）；胎牛血清、胰蛋白酶（美国Gibco公司，货号分别为：232700、M2128）；MTT粉（美国Sigma公司，货号：0222701）；细胞裂解液（上海Beyotime公司，货号：P0013）；BCA蛋白浓度测定试剂盒（上海碧云天生物公司，货号：P0010S）；Tris-HCL溶液（pH6.8、pH8.8）（南京凯基生物公司，货号分别为：KGB005、KGB009）；氯化钠（上海Beyotime公司，货号：ST347）；氯化钾（上海Beyotime公司，货号：ST345）；兔抗人E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin、β-actin单克隆抗体、HRP标记的兔抗山羊IgG抗体（美国CST公司，货号分别为：14472S、13116S、5741T、3700S、14708S）。

1.3 仪器蛋白电泳槽、全自动酶标板分析仪、SDS-PAGE凝胶成像分析仪（美国Bio-Rad公司）；倒置荧光显微镜（日本Olympus公司）。

2 方法

2.1 药物制备COE的制备过程如下［3-4］：将南蛇藤茎切成小段，并粉碎成粉，用95%乙醇提取3次，回收溶剂至干，加水分散后，再依次用石油醚和乙酸乙酯萃取3次，回收乙酸乙酯层，减压浓缩并进行真空冻干，最后得到的即是COE。……