包梦莹，邹志萱，樊慧琴，黄媛媛，王佃云，刘立恒

（江西农业大学动物科学技术学院，江西南昌 330045）

危害养鸡业的胞内寄生性原虫病，呈世界范围分布，发病率高达50%～70%，死亡率为20%～30%，严重者可达80%[1～2]。传统的抗球虫药物和活疫苗控制方法有其自身的局限性和不足[3]。本实验通过使丝氨酸羟甲基转移酶表达纯化，将DNA苗通过肌肉注射进入鸡只体内，分析结果，检测该DNA疫苗的抗柔嫩艾美耳的能力，为新型抗球虫疫苗的开发提供参考。

1 材料

1.1 实验动物

健康的1日龄海兰褐蛋公鸡，将其饲养在经甲醛和高锰酸钾熏蒸严格消毒，高温火枪烘烤、高压水枪冲洗的鸡舍，以保证雏鸡生活环境为健康无球虫环境。所用饲料中均不含有任何抗球虫药物，鸡只饲养至14日龄备用。

1.2 基因工程疫苗

pVAX 1.0-丝氨酸羟甲基转移酶DNA，pVAX 1.0-空质粒，-20℃下保存备用。

2 实验方法

2.1 DNA疫苗质粒大量提取与纯化

将带有重组质粒的宿主菌取出，取200μL加入到含有卡那霉素的LB培养基中复苏过夜。次日继续用1000mL新鲜LB培养基进行扩大培养，12000 rpm离心10min收集沉淀，放入-4℃保存。后采用大提质粒法大量提取DNA疫苗（具体流程参考分子生物学实验指导）。

2.2 试验设计

饲养于无球虫环境之中的1日海兰褐蛋公鸡，试验组鸡共分为4组，其中每组雏鸡30羽，进行随机分组，分为感染非免疫组（红对照组，攻虫，不免疫，注射TE）、非感染非免疫组（白对照组，不攻虫、不免疫，注射TE）、pVAX 1.0-丝氨酸羟甲基转移酶DNA组（注射DNA疫苗，攻虫）以及pVAX 1.0-空质粒组（注射空质粒，攻虫）。14日龄首免：鸡只腿部肌肉注射200μl pVAX -丝氨酸羟甲基转移酶DNA质粒/只。……