■杜 红 1孙弟芬 1易 鑫 1徐 丹 1廖建红 2王 枫 2舒 刚

（1.四川农业大学动物医学院，四川成都 611130；2.通江原乡梅花鸡发展有限公司，四川巴中 636063）

养殖对环境的影响越来越受到关注，如何处理养殖过程中产生的粪便和污水直接关系到养殖场的生存问题。同时，由于国家对农业用地的严格控制，基本农田修建鸡舍也几乎不可能。发酵床是利用专门发酵菌发酵谷壳或锯末等物质制备而成，可以不硬化土地，同时能分解畜禽产生的粪尿问题，这样能解决粪便污染和用地的问题。发酵床养鸡技术是利用自然环境中的生物资源，即采集土壤中的多种有益微生物，通过对这些微生物进行培养、扩繁，形成有相当活力的微生物母种，再按一定配方将微生物母种、稻草以及一定量的辅助材料和活性剂混合，形成有机垫料。在按照一定要求设计的鸡舍里垫上有机垫料，再将鸡放入鸡舍，鸡从小到大都生活在这种有机垫料上面。鸡的排泄物被有机垫料里的微生物迅速降解、消化，不需要对鸡的排泄物进行人工处理，更不需要有粪便清扫、贮存、处理设施、装备和能源，达到零排放，同时不对环境造成污染，生产有机鸡肉、有机鸡蛋，同时不对环境造成污染。发酵床养鸡技术是伴随着农业生产实践一同发展的技术，是实践者的技术，利用发酵床养猪、养鸡、养牛都已经得到了应用推广，而对于发酵床饲养四川巴中地区的地方品种巴中山地梅花鸡还没有报道。

益生菌是通过定殖在动物体内，改变宿主某一部位菌群组成的一类对宿主有益的活性微生物。通过调节宿主黏膜与系统免疫功能或调节肠道内菌群平衡，促进营养吸收，保持肠道健康的作用，从而产生有利于宿主健康作用的单微生物或组成明确的混合微生物。有研究表明，益生菌添加在日粮中能够加快肉鸡的生长速度，抑制疾病发生，降低死亡率，提高肉鸡鸡肉品质。目前临床研究中最常用的菌种为乳酸杆菌属、粪链球菌属、芽孢杆菌属和酵母菌属，当前已经广泛用于畜禽的促生长、提高免疫力。

四川通江巴中山地梅花鸡形成历史大约有2 000年，经自然选育而形成，因经济封闭，交通不便，产品常年滞销。该品种体格中等、头颈高举、尾羽上翘、体格结实，属蛋肉兼用型(其中的梅花羽系体型接近肉用型)，具有适应性好、抗病力强、产蛋和产肉性能良好、肉质鲜美等优点，深受养殖户和消费者的喜爱。鉴于该品种主要以散养为主，试验拟开展利用益生菌配合发酵床饲养巴中山地梅花鸡，考察对其生长性能和屠宰性能、肠道菌群的影响，为推广应用益生菌和发酵床饲养巴中山地梅花鸡技术提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

30日龄健康巴中山地梅花鸡母鸡600只，体重（305.22±12.00）g，由通江石墩子农业公司提供。发酵菌种和益生菌(干酪乳杆菌K1含量为1.0×108CFU/g、枯草芽孢杆菌JS01含量为1.0×108CFU/g)由四川农业大学微生态中心提供。谷壳和锯末由当地精米加工厂和木材厂提供。EMB琼脂、HE琼脂、LBS琼脂、BS琼脂购自杭州微生物试剂有限公司。

1.2 发酵床的制备

发酵菌剂每千克可铺发酵床20 m2，按1∶10比例加入玉米粉后加水混匀稀释备用。

新鲜锯末和干爽的谷壳，按照体积比1∶1准备，0.5 m3混合垫料可以铺设1 m2。稀释好的发酵菌均匀洒在垫料中，可逐层加入，然后用洋铲进行混合，同时喷少量水，湿度以40%为宜，手握垫料感觉湿润即可，决不能滴水，这是发酵床制备的关键。搅拌3次后，堆积垫料，上面铺设透气的纱布。一般冬天气温低，需要堆积5～7 d，夏天温度高，3 d即可。当见有热气冒出或内部温度达到50℃以上时，发酵完成。把发酵好的垫料在进鸡前3～5 d铺设好，控制厚度在夏天15 cm，冬天可增加到20 cm。

1.3 试验分组与基础日粮组成

试验选取30日龄健康巴中山地梅花鸡母鸡600只，体重(305.22±12.00)g，随机分为对照组、发酵床组与益生菌加发酵床组，每个组4个重复，每个重复50只。对照组、发酵床组饲喂基础日粮，益生菌加发酵床组在基础日粮中添加0.1%的益生菌。饲料采用不含抗生素的全价日粮，按肉鸡营养需要(NRC—1994)配制，其配方及营养水平见表1。

表1 基础日粮组成及营养水平

1.4 饲养管理

全天自由采食和饮水。免疫接种按常规程序进行。各组在同一鸡舍饲养，同一饲养员，饲养密度为6只/m2，温度保持在(25±2)℃。

1.5 指标测定及方法

1.5.1 日常观察

观察各组母鸡日常行为表现，对发生死亡的母鸡只进行解剖，查找死亡原因。

1.5.2 生长性能测定

耗料情况每周统计1次，并分别在试验后的45、90 d早上8:00空腹称重，计算平均日增重、平均日采食量和料重比，成活率。

1.5.3 屠宰性能测定

90 d时，各组每个重复随机选取4只鸡先称活重后，颈部放血处死后解剖，分离主要实质器官，计算免疫器官指数；并再按《NY/T 823—2004家禽生产性能名词术语和度量统计方法》中肉用性能规定进行屠宰，计算出屠宰率、全净膛率、半净膛率、胸肌率、腿肌率、腹脂率。

免疫器官指数=免疫器官鲜重(mg)/试鸡活重(g)

1.5.4 肠道菌群检测指标的测定

无菌采集屠宰的母鸡的盲肠内容物，采用平板培养计数法分别计数各处理组盲肠内容物中的大肠杆菌、双歧杆菌、乳酸杆菌数，并以[lg(CFU/g)]表示每克盲肠内容物所含细菌菌落数。

1.6 数据处理

试验结果采用SPSS 22.0进行单因素方差分析，再用LSD法做多重比较，数据以“平均值±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 日常观察（见表2）

表2 巴中山地梅花鸡母鸡日常情况

发酵床组与益生菌加发酵床组的鸡群的外观较好，羽毛光亮，未发生腹泻和球虫感染；对照组鸡群出现跛脚和腹泻及球虫感染和死亡；对照组死亡原因有球虫感染和腹膜炎、关节炎、弱鸡，其他组有意外死亡和弱鸡淘汰。对照组的普通垫料在使用过程中不能分解粪便，有结块的现象，同时发出难闻气味；发酵床组和益生菌加发酵床组的垫料蓬松，粪便都能分解，无明显鸡粪味道。具体情况见表2。

2.2 益生菌配合发酵床养殖模式对巴中山地梅花鸡母鸡生长性能的影响（见表3）

从表3可以看出在1～45 d时，益生菌加发酵床组末重和平均日增重、成活率显著高于对照组（P＜0.05），料重比显著低于对照组（P＜0.05）；发酵床组各指标（除成活率外）与其他组差异不显著（P＞0.05）。在46～90 d时，发酵床组的末重、平均日增重显著高于对照组（P＜0.05），料重比显著低于对照组（P＜0.05）；各组平均日采食量和成活率差异不显著（P＞0.05）。在1～90 d时，发酵床组与益生菌加发酵床组的末重、平均日增重、成活率显著高于对照组（P＜0.05），料重比都显著低于对照组（P＜0.05）；益生菌加发酵床组的平均日采食量显著高于对照组（P＜0.05），而发酵床组与其他组平均日采食量差异不显著（P＞0.05）。说明发酵床模式养巴中山地梅花母雏鸡能够提高鸡的生长性能，且益生菌配合发酵床效果更明显。

表3 益生菌配合发酵床对巴中山地梅花鸡母鸡生长性能的影响

2.3 益生菌配合发酵床养殖模式对巴中山地梅花鸡母鸡屠宰性能的影响（见表4）

表4 益生菌配合发酵床对巴中山地梅花鸡母鸡屠宰性能的影响(%)

由表4可知，各组屠宰率、全净膛率无显著性差异(P＞0.05)。对照组的半净膛率、胸肌率、腿肌率显著低于发酵床组和益生菌加发酵床组（P＜0.05），对照组的腹脂率显著高于益生菌组和益生菌加发酵床组（P＜0.05）。说明生物发酵床能够对巴中山地梅花鸡母鸡的屠宰性能有显著改善作用。

2.4 益生菌配合发酵床养殖模式对巴中山地梅花鸡母鸡免疫器官指数的影响（见表5）

表5 益生菌配合发酵床对巴中山地梅花鸡母鸡免疫器官指数的影响(mg/g)

从表5免疫器官指数可以看出，对照组在90 d时脾脏指数、胸腺指数显著低于发酵床组和益生菌加发酵床组（P＜0.05）；法氏囊指数各组差异不显著（P＞0.05）。说明发酵床及益生菌能够提高巴中山地梅花鸡母鸡的免疫器官的发育并延缓法氏囊的萎缩。

2.5 益生菌配合发酵床养殖模式对巴中山地梅花鸡母鸡肠道菌群的影响（见表6）

表6 益生菌配合发酵床对巴中山地梅花鸡母鸡肠道菌群的影响[lg(CFU/g)]

从表6可以看出，对照组大肠杆菌数量显著高于发酵床组和益生菌加发酵床组（P＜0.05）；对照组中的乳酸杆菌和双歧杆菌数都显著低于发酵床组和益生菌加发酵床组（P＜0.05）；发酵床组的乳酸杆菌数也显著低于益生菌加发酵床组（P＜0.05）。说明采用发酵床和益生菌加发酵床饲养模式均不但显著减少巴中山地梅花鸡母鸡肠道中大肠杆菌，还能显著增加乳酸杆菌、双歧杆菌数量，其中益生菌配合发酵床效果更好。

3 讨论

3.1 益生菌配合发酵床养殖技术对巴中山地梅花鸡母鸡群日常行为的影响

发酵床垫料蓬松，里面富含大量的益生菌和产生的菌体蛋白，鸡群喜欢进行翻刨和沙浴，发酵床的使用，促使鸡群更健康，减少了粪便排放和球虫的发生。而普通垫料组随着养殖时间的延长，垫料堆积增加，粪便分解困难，导致发酵后，氨气等异味较重，鸡群匍匐在结块垫料上导致出现胸部囊肿和关节炎，并导致死亡和淘汰增加。通过对比发现，鸡群更喜欢在发酵床和益生菌加发酵床上生活，普通垫料需要更换才能保证鸡群健康。

3.2 益生菌配合发酵床养殖技术对巴中山地梅花鸡母鸡生长性能的影响

发酵床在使用中会分解肉鸡粪便产生菌体蛋白，鸡在翻耙的过程中往往进行食用，从而补充机体的益生菌，促进机体对营养物质的消化吸收，而提高生长性能。同时，发酵床的使用还能减少寄生虫的发生，保证雏鸡肠道健康。王润之等证实发酵床饲养能提高优质鸡平均日采食量，降低料重比。李运喜等发现微生物发酵床能够提高肉鸡成活率，并且发酵床中微生物能够产生菌体蛋白，提高饲料转化率。本试验结果表明生物发酵床组和益生菌加发酵床组在试验结束时各项指标都显著优于对照组，特别是在提高急鸡鸡平均日增重和提高平均日采食量上，益生菌加发酵床优势更明显。

3.3 益生菌配合发酵床养殖技术对巴中山地梅花鸡母鸡屠宰性能的影响

畜禽产肉性能往往用屠宰率和全净膛率来进行评估，产肉性能较好的肉鸡的屠宰率要求不低于80%，全膛率不低于60%。黄玉萍研究发现京海黄鸡及其杂交组合群体胸肌中粗脂肪含量显著小于AA肉鸡(P＜0.05)，群体鸡腿肌中水分含量和蛋白质含量无显著差异。本试验结果表明益生菌加发酵床组的半净膛率、胸肌率、腿肌率都显著高于对照组，在提高屠宰性能方面上具有一定优势。肉鸡的屠宰性能与其饲养条件有密切关系，使用发酵床模式饲养的母鸡可以在松软的发酵床上进行啄食，活动行为频繁，促进消化系统的发育；而普通垫料鸡舍出现结块，潮湿，有害气体浓度大，鸡只往往呆立不动。这种情况会导致两种饲养模式下鸡只的肌肉发育出现差异，从而导致屠宰性能中胸肌率、腿肌率和腹脂沉积出现差异。陈长宽等比较了笼养和发酵床饲养对肉用母鸡的影响，发现发酵床饲养组的各项屠宰性能指标有增加的趋势，但没有显著差异，与本试验结果不一致，可能与使用的品种和饲喂的时间及与网上平养有关。

3.4 益生菌配合发酵床养殖技术对巴中山地梅花鸡母鸡免疫功能的影响

已有试验证实鸡通过采食发酵床中的有益菌及其代谢产物可激活鸡的免疫系统发育，从而促进免疫器官的发育和提高免疫功能。王彬等发现使用发酵床饲养肉鸡，能极大地降低肉鸡呼吸道病和消化道病的发病率和死亡率，提高肠道有益微生物的数量，促进肠道发育，提高肉鸡免疫力。另外，益生菌剂及生物发酵床的垫料中强大的微生物活菌剂，能够有效改善肉鸡肠道的微生态环境，抑制病原菌的生存，显著提高肉鸡的免疫功能。李可等研究发现在基础饲粮中添加地衣芽孢杆菌、屎肠球菌和丁酸梭菌三种益生菌均显著提高了AA肉鸡免疫器官指数，提高非特异性免疫反应，增强机体免疫力。鸡的脾脏、胸腺、法氏囊都是重要的免疫器官，发育情况与其相对重量有关，相对重量增加，在一定程度上能够反映机体抵抗外来病原微生物的能力。张曼等证实了益生菌发酵床养殖模式可以增强肉杂鸡血清中新城疫和禽流感病毒的抗体。本试验中益生菌加发酵床组及发酵床组鸡的脾脏指数和胸腺指数均显著高于对照组，因此表明益生菌加发酵床的联合应用能够在一定程度上提高免疫器官指数，增强抗病力。环境因素也处处影响着鸡群的免疫情况和健康状态。刘啟斌等发现生物发酵床温度较高，病原微生物难以生存，有利于预防球虫病的发生和流行。张伟勇等发现发酵床有减少鸡场耐药菌种、提高鸡群药敏感度、降低整体用药量的应用效果。

3.5 益生菌配合发酵床养殖技术对巴中山地梅花鸡母鸡肠道菌群的影响

肠道菌群是由数百种微生物组成的复杂群体，起到免疫调节、营养消化的功能，由微生物间的相互作用，以及由微生物产生的代谢产物，如短链脂肪酸（SCFAs）、色氨酸、共轭亚油酸、吲哚及其衍生物等介导对宿主健康起作用。郭彤等用发酵床养猪能明显促进断奶仔猪肠道乳酸菌和双歧杆菌的增殖，明显抑制大肠杆菌和沙门氏菌的增殖，改善断奶仔猪消化道微生态系统，从而促进了断奶仔猪的生长。任素芳等发现发酵床养殖未改变仔猪胃肠道细菌变化规律，但发酵床垫料中的乳酸菌数量不影响断奶仔猪消化道内的乳酸菌数量。孙彦发现发酵床养鸭垫料的细菌数量及多样性差异显著，表层垫料的细菌数量及多样性高于底层垫料；随使用时间增加，垫料的细菌数量及多样性降低；垫料中的优势菌为芽抱杆菌。于明等发现饲粮中添加复合益生菌制剂可提高肉仔鸡的生长性能，增加盲肠有益菌群数量，改善免疫功能，提高肉仔鸡的生长性能，其中复合益菌的添加比例在1.0%时效果较好。本试验中发酵床组和益生菌加发酵床组乳酸杆菌和双歧杆菌数都显著高于对照组，大肠杆菌数量显著低于对照组，因此表明发酵床加益生菌的联合应用能够在一定程度上调节肠道菌群，促进有益菌的生长，抑制有害菌的繁殖，从而促进机体消化吸收，提高生长性能和免疫功能。贺濛初发现在白羽鸡日粮中添加1%益生菌，当受到大肠杆菌攻击时，可以维持肠道菌群的多样性和肠道菌群的结构不受攻毒影响而改变，并且在肠道发生炎症时，可降低肠道内TLR2、TLR4、Myd88、TRAF-6和AP-1蛋白表达量及mRNA相对表达量，从而减少免疫球蛋白和炎性因子的产生，减轻炎症反应，预防和治疗大肠杆菌病。

4 结论

本试验表明，生物发酵床能够有效提高巴中山地梅花鸡母鸡的生长性能、屠宰性能、免疫功能和改善肠道菌群，且在全价料中添加益生菌剂效果更佳，在实际生产可以进行推广应用。