张加强,陆 群,赵 昱

(1.西南交通大学 生命科学与工程学院,四川 成都 610031;2.云南省药用昆虫及蛛形类资源开发利用工程实验室,云南 大理 671000)

(R)-1-(4-溴苯基)乙胺是许多具有药物活性和生物活性化合物的重要合成中间体,例如可以用于合成新型广谱喹诺酮类抗菌药加雷沙星以及新型突变体B-Raf(V600E)强选择性激酶抑制剂[1-2]。转氨酶催化前手性酮的直接胺化为手性纯胺的合成提供了一个较优的选择[3],但水溶性的酶分子在苛刻的反应条件下稳定性和选择性较差,同时储存、回收和清除细胞碎片也相当困难[4-5]。连续流生物催化具有催化效率快、时空产率高,易于下游处理(便于分离)等优点[6],已成为绿色可持续工业化生产的重要研究领域。因此将酶固定在树脂载体上用于连续流催化合成(R)-1-(4-溴苯基)乙胺具有一定的研究价值。

1 实验部分

1.1 仪器与试药

LC-20AD型高效液相色谱仪、SPD-M20A检测器,日本岛津;CMax Plus酶标仪,美谷分子仪器;ES-1、ES-103B、ESR-2,天津南开和成;LX-1000EP、LX-1000HA,西安蓝晓;ReliZyemTMOD-403,日本三菱化工;ATA-117转氨酶由实验室构建并保藏;Bradford蛋白浓度测定试剂盒,生工生物工程;其他常规试剂均为市售分析纯。

1.2 实验方法

1.2.1 固定化载体的筛选

配制100 mmol/L、pH 8.0的磷酸盐缓冲液5 mL,加入0.5 g树脂载体和20 mg转氨酶,混合后置于30 ℃下搅拌24 h,过滤洗涤,加入50 mmol/L、pH 8.5的磷酸盐缓冲液5 mL(含3 mol/L甘氨酸),30 ℃下搅拌20 h,抽滤洗涤,得到固定化酶[7]。

1.2.2 酶蛋白质量浓度对转氨酶固定化的影响

配制100 mmol/L,pH 8.0的磷酸盐缓冲液,分别加入定量转氨酶冻干粉制成4,6,8,10,12,14 g/L的均一酶液。分别取2 mL酶液加入0.2 g ES-103B树脂,置于30 ℃下搅拌24 h。……