辛芩颗粒联合艾灸对过敏性鼻炎模型大鼠水通道蛋白的研究

2021-07-05黄振河张克辉游龙贵王富华王心涛

中国医学创新 2021年14期

关键词：艾灸

黄振河张克辉游龙贵王富华王心涛

【摘要】目的：探究辛芩顆粒联合艾灸对过敏性鼻炎（AR）模型大鼠水通道蛋白表达的影响，为临床治疗AR提供更佳的方案。方法：选取SD大鼠60只，雌雄各半，适应性喂养2周后随机分为对照组、AR组、西药治疗组、艾灸治疗组，辛芩颗粒治疗组，辛芩颗粒联合艾灸治疗组，每组10只，雌雄各半。对照组以标准颗粒饲料喂养，AR组在造模成功后以标准颗粒饲料喂养，西药治疗组采用西替利嗪滴剂灌胃处理，艾灸治疗组采用艾灸治疗，辛芩颗粒治疗组采用辛芩颗粒灌胃处理，辛芩颗粒联合艾灸治疗组采用辛芩颗粒灌胃+艾灸治疗。观察各组小鼠的行为学指标，比较各组小鼠鼻黏膜AQP1、AQP2及AQP5 mRNA表达水平及血清IL-4、IL-10和IgE水平。结果：造模成功时，AR组、西药治疗组、艾灸治疗组、辛芩颗粒治疗组、辛芩颗粒联合艾灸治疗组的行为学评分较造模前均显著升高（P<0.05）;治疗2周，西药治疗组、艾灸治疗组、辛芩颗粒治疗组、辛芩颗粒联合艾灸治疗组的行为学评分较造模成功时均显著降低，且辛芩颗粒联合艾灸治疗组低于西药治疗组、艾灸治疗组、辛芩颗粒治疗组（P<0.05）。治疗2周，艾灸治疗组、辛芩颗粒治疗组、辛芩颗粒联合艾灸治疗组的AQP1、AQP2、AQP5 mRNA表达水平均低于造模成功时（P<0.05）;治疗2周，艾灸联合辛芩颗粒治疗组的AQP1、AQP2、AQP5 mRNA表达水平均低于其他治疗组，差异均有统计学意义（P<0.05）。西药治疗组、艾灸治疗组、辛芩颗粒治疗组、辛芩颗粒联合艾灸治疗组血清IL-4、IL-10和IgE水平均较AR组改善（P<0.05）。结论：AR大鼠的鼻黏膜AQP1、AQP2及AQP5 mRNA表达水平高，通过辛芩颗粒联合艾灸可有效控制AQP1、AQP2及AQP5 mRNA表达，降低IL-4、IgE水平，升高IL-10水平。

【关键词】辛芩颗粒艾灸 AR 水通道蛋白

Study on Xinqin Granules Combined with Moxibustion on Aquaporin in Rats with Allergic Rhinitis/HUANG Zhenhe， ZHANG Kehui， YOU Longgui， WANG Fuhua， WANG Xintao. //Medical Innovation of China， 2021， 18（14）： 00-009

[Abstract] Objective： To explore the influence of Xinqin Granules combined with moxibustion on the expression of aquaporin in AR model rats， so as to provide a better treatment scheme for clinical treatment of AR. Method： A total of 60 SD rats， half male and half female， were selected and randomly divided into control group， AR group， western medicine treatment group， moxibustion treatment group， Xinqin Granules treatment group， and Xinqin Granules combined with moxibustion treatment group after adaptive feeding for 2 weeks， 10 rats in each group， half male， half female. Control group in a standard grain feed， AR after the success of the group in the building in a standard grain feed， western medicine treatment group treated with Cetirizine drops lavage treatment， moxibustion treatment group treated with moxibustion， Xinqin Granules treatment group used Xinqin Granules lavage treatment， Xinqin Granules combined moxibustion treatment group adopted Xinqin Granules lavage and moxibustion therapy. The behavioral indexes of mice in each group were observed， and the mRNA expression levels of AQP1， AQP2 and AQP5 in nasal mucosa and the serum levels of IL-4， IL-10 and IgE were compared. Result： When modeling was successful， the behavioral scores of AR group， western medicine treatment group， moxibustion treatment group， Xinqin Granules treatment group and Xinqin Granules combined with moxibustion treatment group were significantly higher than those before modeling （P<0.05）. 2 weeks of treatment， the behavioral scores of the western medicine treatment group， the moxibustion treatment group， the Xinqin Granule treatment group and the Xinqin Granule combined with moxibustion treatment group were significantly decreased compared with the successful modeling， and the Xinqin Granule combined with moxibustion treatment group was lower than the western medicine treatment group， the moxibustion treatment group and the Xinqin Granule treatment group （P<0.05）. 2 weeks of treatment， the mRNA expression levels of AQP1， AQP2 and AQP5 in moxibustion treatment group， Xinqin Granules treatment group and Xinqin Granules combined with moxibustion treatment group were all lower than those in the successful membrane formation （P<0.05）. 2 weeks of treatment， the mRNA expression levels of AQP1， AQP2 and AQP5 in the moxibustion combined with Xinqin Granules treatment group were lower than those in the other treatment groups， the differences were statistically significant （P<0.05）. Serum IL-4， IL-10 and IgE levels in western medicine treatment group， moxibustion treatment group， Xinqin Granules treatment group and Xinqin Granules combined with moxibustion treatment group were all improved compared with AR group （P<0.05）. Conclusion： The mRNA expression levels of AQP1， AQP2 and AQP5 in nasal mucosa of AR rats are high. Xinqin Granules combined with moxibustion can effectively control the mRNA expressions of AQP1， AQP2 and AQP5， reduce the levels of IL-4 and IgE， and increase the level of IL-10.

[Key words] Xinqin Granules Moxibustion AR Aquaporin

First-authors address： Ganzhou Peoples Hospital， Ganzhou 341000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.14.002

过敏性鼻炎（allergic rhinitis， AR）是一种由免疫球蛋白E（immunity globulin-E， IgE）介导的炎症反应性疾病，当患者接触到过敏原时会出现鼻子瘙痒、红肿、打喷嚏及流清鼻涕等症状[1-4]。近年来AR发病率不断升高，尤其以青壮年为主，严重降低了患者的生活质量[5-6]。目前，AR的治疗未取得理想效果，这主要与其发生机制尚未完全阐明有着很大的关系。中医认为AR的发生主要与肺脾肾阳气亏虚，体质特异，卫外不固有关，而中医理论认为“肺开窍于鼻，肺主通调水道”[7]，故笔者推测AR患者可能存在水液代谢障碍。水通道蛋白是一种可控制水进出细胞的内在膜蛋白，因此本研究探究辛芩颗粒联合艾灸疗法对AR的作用机制是否与影响其鼻黏膜水通道蛋白AQP1、AQP2及AQP5 mRNA的表达水平有关，为临床治疗AR提供疗效更佳的方案。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料本实验起止时间为2018年10月-2020年10月，选取SD大鼠60只，由南昌大学医学院实验动物中心提供，体重（200±50）g，雌雄各半，以标准颗粒饲料在屏障系统中适应性喂养2周，然后随机分为对照组、AR组、西药治疗组、艾灸治疗组，辛芩颗粒治疗组，辛芩颗粒联合艾灸治疗组，每组10只，雌雄各半。

1.2 药品和仪器辛芩颗粒（生产厂家：上海中医大药业股份有限公司，批准文号：国药准字Z31020014，规格：5 g/袋）、盐酸西替利嗪滴剂（生产厂家：香港澳美制药厂，批准文号：HC20150029，规则：10 mL︰0.1 g）、艾灸（武汉国灸科技开发有限公司）、荧光定量PCR仪（美国赛默飞世尔Thermo公司）、紫外分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）。

1.3 过敏性鼻炎模型大鼠制备用乙醚麻醉除对照组之外的所有大鼠，将抗原佐剂混悬液，抗原佐剂混悬液由卵白蛋白1 mg，氢氧化铝凝胶（生产厂家：甘肃扶正药业科技股份有限公司，批准文号：国药准字H62020818，规格：100 mL︰4 g）50 mL组成。分别注射于左右前肢（0.1 mL）和后肢跖部分（0.2 mL）进行致敏。在初次致敏5 d后将0.5 mg卵白蛋白溶解于1 mL生理盐水注入大鼠背部强化致敏，第7天开始用1 mg/mL卵白蛋白滴鼻，10 μL/次，1次/d。大鼠出现鼻塞、流涕、喷嚏、抓鼻等症状即为造模成功。

1.4 方法

1.4.1 治疗方法（1）对照组以标准颗粒饲料喂养;（2）AR组造模成功后以标准颗粒饲料喂养;（3）西药治疗组在初次致敏第15天开始以西替利嗪滴剂按0.9 mg/kg的量灌胃处理，1次/d;（4）艾灸治疗组在初次致敏第15天开始用艾针灸置于大鼠已脱毛的迎香穴上进行艾灸治疗，2枚/次，1次/d，每次持续8 h;（5）辛芩颗粒治疗组按0.5 g/kg的量给予辛芩颗粒灌胃治疗，3次/d;（6）辛芩颗粒联合艾灸治疗组结合（4）、（5）的方法進行治疗。以上治疗时间均为2周。

1.4.2 实时荧光定量PCR（real-time quantitative polymerase chain reaction， real-time qPCR）取鼻呼吸区黏膜置于-180 ℃液氮罐中保存，取组织研磨后用Trizol抽提组织总RNA，经紫外分光光度计，琼脂糖电泳检测RNA的纯度和完整性。照逆转录试剂盒（takara，Code No.RR036A）和SYBRPremix Ex TaqTM试剂盒说明书分别合成cDNA及建立反应体系：总体积20 μL，2 μL cDNA为模板扩增，肌动蛋白β-actin为内参。PCR反应条件为：预变性95 ℃，10 min;变性95 ℃，30 s;58 ℃，31 s;延伸72 ℃，30 s;40个循环。反应结束后，ABI7300 SDS Software自动分析荧光信号并将其转换CT值，以2-△△CT法计算目的基因与内参基因荧光的比值。

1.5 观察指标及判定标准（1）行为学评分：①鼻痒：搔鼻1～5次为1分，6～10次为2分，11次及以上为3分;②喷嚏：1～5个为1分，6～10个为2分，11个及以上为3分;清涕：溢至鼻孔为1分，超出前鼻孔为2分，涕流满面为3分，5分及以上即为造模成功。（2）血清IL-4、IL-10和IgE水平：腹主动脉采血并分离血清，采用酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay， Elisa）检测血清IL-4、IL-10和IgE水平，试剂盒购自亚诺法生技股份有限公司。（3）比较鼻黏膜AQP1、AQP2及AQP5 mRNA表达水平。

1.6 统计学处理采用SPSS 24.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，两组数据组间比较采用t检验，组内比较采用配对t检验，多组数据组间比较采用单因素方差分析;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 行为学评分评定造模前，各组行为学评分比较，差异无统计学意义（P>0.05）;造模成功时，对照组行为学评分与造模前比较，差异无统计学意义（P>0.05）;造模成功时，AR组、西药治疗组、艾灸治疗组、辛芩颗粒治疗组、辛芩颗粒联合艾灸治疗组的行为学评分较造模前均显著升高（P<0.05）;治疗2周，西药治疗组、艾灸治疗组、辛芩颗粒治疗组、辛芩颗粒联合艾灸治疗组的行为学评分较造模成功时均显著降低，且辛芩颗粒联合艾灸治疗组低于西药治疗组、艾灸治疗组、辛芩颗粒治疗组（P<0.05）。见表1。

2.2 各组qPCR检测水通道蛋白mRNA表达水平比较造模成功时，AR组、西药治疗组、艾灸治疗组、辛芩颗粒治疗组、辛芩颗粒联合艾灸治疗组的AQP1、AQP2、AQP5 mRNA表达水平与对照组比较，差异均有统计学意义（P<0.05）;治疗2周，艾灸治疗组、辛芩颗粒治疗组、辛芩颗粒联合艾灸治疗组的AQP1、AQP2、AQP5 mRNA表达水平均低于造模成功时（P<0.05）;治疗2周，艾灸联合辛芩颗粒治疗组的AQP1、AQP2、AQP5 mRNA表达水平均低于其他治疗组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.3 各组治疗2周血清IL-4、IL-10和IgE水平比较治疗2周，西药治疗组、艾灸治疗组、辛芩颗粒治疗组、辛芩颗粒联合艾灸治疗组血清IL-4、IL-10和IgE水平均较AR组改善（P<0.05），见表3。

3 讨论

AR的发生主要与细胞因子、细胞间黏附分子-1及部分神经肽的相互作用密切相关，变应原刺激机体产生的特异性IgE抗体结合在鼻黏膜使其致敏，当变应原再次侵入时会导致一系列生化反应[8-10]。临床常采用血清IgE作为AR的诊断依据，本研究中各治疗组IgE水平较AR组均显著降低，且辛芩颗粒联合艾灸治疗组降低最多，接近对照组水平。变应性鼻炎是Th2型细胞优势分化和Th2型细胞因子IL-4、IL-5等过度表达引起的疾病，其发生与Th1和Th2型细胞因子网络间的平衡异常有关。很多既往文献报道，变应性鼻炎发生过程中，IL-4水平会显著升高。本研究对AR大鼠进行西药、艾灸、辛芩颗粒及辛芩颗粒联合艾灸进行治疗，经治疗后各组AR大鼠IL-4水平均降低。经治疗后，各治疗组AR大鼠IL-10水平升高，IL-10是抑制体内炎症反应的保护性因子，能调节免疫功能，是变应性鼻炎发病中的一种抗炎因子，能够缓解炎性症状，起到较好的治疗作用。

生物体主要由水溶液组成，水溶液在细胞膜通道的进出与细胞的多种功能有关。20世纪50年代中期，水通道被发现，并在80年代中期确认具有吸收水分子功能的水通道蛋白就是水通道[11-15]。水通道蛋白维持机体液体转运平衡，其与多种疾病的发生有关，变应性鼻炎的高分泌性可能就与其表达有关，因而研究水通道蛋白有助于临床治疗相关疾病[16]。

AQP5是一种存在于鼻黏膜中的水通道蛋白，有研究表明其与变应性鼻炎时腺体过度分泌的病理过程有关，在AR个体内有大量AQP5表达[17-19]。AQP1在鼻咽上皮下毛细血管表达丰富，可能会诱导内淋巴生成增多而导致AR。AQP2在肾脏组织表达较多，参与水液代谢，与多种疾病的发生有着一定的关系[20]。本研究针对AQP1、AQP2、AQP5在AR大鼠中的表达情况进行研究，治疗2周，各治疗组水通道蛋白表达水平较模型组均显著降低，且艾灸联合辛芩颗粒治疗组更低，提示水通道蛋白在AR大鼠中高表达，参与了AR的病理过程，可通过艾灸联合辛芩颗粒进行治疗。行为学评分显示治疗2周，辛芩颗粒联合艾灸治疗组评分降低最多，进一步验证了辛芩颗粒联合艾灸治疗AR的效果。

综上，水通道蛋白的表达水平与AR有一定的关系，可通过辛芩颗粒联合艾灸进行有效治疗。

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