黄海，宋佳璇，张迪，高睿，徐万魁*（.辽宁省检验检测认证中心 辽宁省药品检验检测院，沈阳 0035；.中国人民解放军北部战区总医院，沈阳 006）

苯佐卡因（benzocaine）为局麻药，临床上用于创面麻醉、溃疡面麻醉、黏膜表面麻醉和痔疮麻醉。苯佐卡因也是重要的医药中间体，可作为奥索仿、奥索卡因、普鲁卡因等前体原料[1]。国内上市的含有苯佐卡因的制剂有软膏剂、凝胶剂和含片剂3种剂型。合成过程中，使用钯碳作为加氢催化剂，因此成品中有钯残留的可能，美国药典通则USP＜233＞和ICH Q3D元素杂质指导原则中都将钯分级为2B，规定口服制剂原料药中钯的限度为10 μg·g－1；砷（As）、镉（Cd）、汞（Hg）、铅（Pb）分级为1类，钒（V）、钴（Co）、镍（Ni）分级为2A，也是在生产过程中容易引入的金属杂质，有潜在毒性，并诱导药物降解，其含量在美国药典通则和ICH Q3D中也有严格的规定，其限度分别为1.5、0.5、3、0.5、5、10、20 μg·g－1[2-3]，因此有必要对以上金属杂质的含量进行控制。近年来，使用ICP-MS法测定原料药与药品制剂中金属杂质含量的研究也屡有报道[4-11]，ICP-MS具有灵敏度高、线性动态范围宽等优点，可以同时快速测定多个元素，因此，本文拟建立ICP-MS法对苯佐卡因原料药中这8种金属元素的含量进行考察。

1 仪器与试药

NexION 350X电感耦合等离子体质谱仪（micromist雾化器，石英旋流雾室）（PerkinElmer公司）；CEM MARS 240/50 微波消解仪（CEM公司）；XP205电子分析天平（梅特勒-托利多公司）。

单元素标准溶液：钴（Co，批号：191059-2）、镍（Ni，批号：18C029-3）、钒（V，批号：18C019-2）、砷（As，批号：191010-2）、钯（Pd，批号：19C015）、镉（Cd，批号：191037-2）、铅（Pb，批号：191001）、汞（Hg，批号：18C033-2）、铟（In，批号：18B016）、铋（Bi，批号：18B020-2）（国家有色金属及电子材料分析测试中心，质量浓度：1000 μg·mL－1）；硝酸（TraceMetal Grade，Fisher化学）；娃哈哈纯净水。苯佐卡因原料药（锦州九泰药业有限责任公司，批号：200201、200202、200203）。

2 方法与结果

2.1 工作条件

射频功率：1895 W；载气：氩气；等离子气流量：18 L·min－1；雾化器流量：0.92 L·min－1；泵速40 r·min－1；进样延迟时间：65 s；测量模式为标准模式，目标元素检测分子量，积分时间和内标选择见表1。

表1 采集参数Tab 1 Acquisition parameter

2.2 内标溶液的制备

精密量取In、Bi单元素标准溶液适量，用5%硝酸稀释制成质量浓度为10 μg·L－1的溶液。

2.3 标准曲线溶液的制备

精密量取V、Co、Ni、As、Pd、Cd、Pb、Hg单元素标准溶液各适量，置于同一100 mL量瓶中，用5%硝酸稀释制得标准储备液，其中Ni质量浓度为10 μg·mL－1，其他元素质量浓度为1 μg·mL－1；精密量取上述标准储备液适量，用5%硝酸定量稀释制成含V、Co、As、Pd、Cd、Pb、Hg分别为0.01、0.1、0.5、5.0、10.0、20.0 μg·L－1，含Ni分别为0.1、1、5、50、100、200 μg·L－1的溶液，即得。

2.4 供试品溶液的制备

精密称取样品约0.1 g，置于微波消解管中，加硝酸5 mL，照微波消解程序（见表2）消解；消解后的溶液放置至室温，用水转移定容至100 mL量瓶中，即得。

表2 微波消解程序Tab 2 Program of microwave digestion

2.5 方法学考察

2.5.1 线性关系考察 取“2.3”项下标准曲线溶液按“2.1”项下条件测定，以各元素强度与对应的内标强度比值（Y）为纵坐标，质量浓度（X）为横坐标进行线性回归，结果见表3，各元素均在各自线性范围内与Y值呈良好线性关系。

2.5.2 检测限与定量限 取硝酸5 mL，照“2.4”项下方法制备空白溶液，进样测定11次，计算11次测定的标准偏差σ，以3倍标准偏差与标曲斜率的比值作为检测限，10倍标准偏差与标曲斜率的比值为定量限，结果见表3。

表3 8种元素线性关系、检测限(LOD)以及定量限(LOQ)结果Tab 3 Standard curves，LOD and LOQ of 8 elements

2.5.3 准确度试验 取样品（批号：200203）0.1 g，精密称定，分别加入标准储备液0.1、0.2、0.4 mL，照“2.4”项下方法操作，制备低，中，高3个质量浓度的供试品溶液，每个浓度平行制备3份，按“2.1”项下条件测定，考察回收率。结果表明，各元素平均加样回收率均在94.7%～102.9%，RSD在1.1%～2.6%（n＝3），准确度符合USP＜233＞规定的70%～150%的验证要求。

2.5.4 重复性试验 取样品（批号：200203）6份，精密称定，照“2.4”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下条件测定，分别计算各元素的RSD，结 果V为1.8%，Co为2.1%，Ni为2.5%，As为2.5%，Pd为1.1%，Cd为1.3%，Hg为2.7%，Pb为2.6%，结果表明方法重复性良好，符合USP＜233＞重复性RSD≤20%的验证要求。

2.5.5 中间精密度试验 在不同日，由另一试验者进行试验操作，结果V、Co、Ni、As、Pd、Cd、Hg、Pb 含量测定平均值分别为1.05、1.03、10.43、0.95、1.16、0.99、1.06、1.09 μg·L－1，RSD分 别为2.7%、1.9%、3.1%、3.4%、1.7%、3.1%、3.2%、1.9%（n＝12），表明本方法的中间精密度良好。

2.6 样品测定结果

取3批苯佐卡因样品（批号：200201、200202、200203），按“2.1”项条件下测定，各元素均有检出，结果见表4，均未超出USP＜233＞规定限度。

表4 样品测定结果Tab 4 Sample determination

3 讨论

ICP-MS灵敏度高、线性动态范围宽，可以同时快速测定多个元素，但也存在诸如信号波动和基体效应，氧化物、双电荷离子、多原子离子、同量异位素和物理效应等干扰[12]，因此，需要考虑如何消除这些影响，找到合适的样品处理和测试方法。

ICP-MS用于痕量金属含量测定，直接溶解样品测定更简便易行，苯佐卡因虽微溶于水，但可溶于5%硝酸，使用5%硝酸溶解直接测定，样品处理相对简单，但由于基质或者其他一些因素的影响，Pd元素平均回收率仅为62.9%，As元素平均回收率为113.0%。内标法可以有效降低仪器漂移和基体效应，通过对钪（Sc）、锗（Ge）、In、Bi 4种内标进行考察，选择了最优的内标，但是无法解决基质对于Pd的影响；采用微波消解处理后的样品回收率有极大改善，基本上去除了基质的影响，各元素的回收率均在94.7%～102.9%。

通过对连续生产的3批样品进行测定，各元素含量均在规定限度范围内，说明生产过程中引入的金属杂质V、Co、Ni、As、Pd、Cd、Hg、Pb均在可控范围内，不会为其制剂的生产带来风险。本方法具有较高的灵敏度，较好的重复性和准确度，适用于苯佐卡因中金属杂质含量的测定。