郑旭玲，殷 文，陈 俊，李 裕，戴 宗，邹小勇

(1.中山大学 化学学院，广东 广州 510275；2.中山大学 生物医学工程学院，广东 广州 510006；3.南方医科大学 药学院，广东 广州 510515)

成熟的microRNA(miRNA)是一类长度约为19～23个碱基的非编码RNA[1]。诸多证据表明，miRNA在包括细胞分化、早期发育、增殖、凋亡等众多生命活动过程中均发挥重要的调控作用[2-3]，其表达水平与许多疾病密切相关，可作为疾病标志物和用于基因治疗以及作为潜在的药物靶点[4]。开发可靠、简单、高效的miRNA检测方法对于疾病的早期诊断具有重要意义。

近年来，基于核酸恒温扩增策略的miRNA检测方法获得极大发展，如滚环扩增[5]、杂交链反应[6]、环介导等温扩增技术[7]等线性扩增反应被成功应用于miRNA定量分析和细胞成像分析。相比之下，指数扩增反应(EXPAR)是一种在短时间可获得高扩增效率(106～109)的核酸恒温扩增方法，为miRNA的快速有效检测带来了便利[8]。EXPAR方法通常采用一个含两段重复序列的对称DNA模板，目标序列与模板的3′端互补杂交后，在聚合酶的作用下沿着模板延伸；延伸出的双链DNA包含切口酶识别序列，被切口酶切割，并在DNA聚合酶的链置换作用下被释放出来，进一步与另一条模板的3′端进行杂交和扩增，形成指数形式的扩增[9]。但这些方法存在如下问题：(1)扩增特异性和扩增效率仍有待提高。miRNA的准确分析有赖于扩增方法的效率和特异性。当前的扩增方法，指数扩增的效率很高，但更高阶的扩增方法很难获得；为提高扩增效率，往往需要复杂的设计和多扩增模板共同参与，且易产生非特异性扩增。……