韩 雪， 顾 伟， 李 婷， 范云帆， 张文莉， 赵吉子， 付英梅

(哈尔滨医科大学 微生物学教研室，黑龙江 哈尔滨 150081)

细菌中长度在50～500 nt的非编码RNA通常被定义为小RNA(small RNA，sRNA)[1]。细菌的sRNA的表达水平受环境因素诱导而改变，继而通过对靶基因的调节，帮助细菌适应环境因素的变化[2-3]。细菌的sRNA也可通过细胞外囊泡等方式被分泌到菌体外，在宿主体内以细胞间信号的跨物种传递方式，发挥基因表达调控的功能，参与感染与免疫进程。例如，细菌胞外sRNA可激活宿主细胞的模式识别受体途径，诱导保护性免疫反应[4-5]；或模拟宿主的miRNA调节靶基因的表达，影响细胞因子和干扰素水平、诱导免疫细胞凋亡[6-7]。高通量测序技术发现，细菌的sRNA也可分布到宿主的各种体液和组织器官中[8-9]。因此，细菌的胞外sRNA，可作为感染性疾病的诊断标志物或治疗监测标志物，也可将其作为新型核酸疫苗加以研制。在NCBI数据库的结核分枝杆菌参考基因组中，注释了20种sRNA，研究发现这些sRNA的调控作用包括影响细菌的生长与转录，蛋白质的分泌，在感染时发挥一定的作用[2,10-11]。但对结核分枝杆菌菌体内外sRNA谱的情况还不清楚。为了研究结核分枝杆菌菌体内外sRNA的表达情况，本研究以BCG菌株为研究对象，测定细菌不同生长时期菌体内外的sRNA谱，并以缺氧为诱导条件，研究BCG菌体外sRNA的变化规律，为筛选有利于结核病诊断的sRNA候选标志物提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 菌株MycobacteriumbovisBacillus Calmette-Guerin Vaccine(BCG,卡介苗) Danish，由哈尔滨市南岗区结核病防治所惠赠。

1.1.2 培养基 BCG培养采用含白蛋白-葡萄糖-过氧化物酶(ADC)的Middlebrook 7H9培养基[12]，购自美国BD公司。……